X Congreso nacional de la Asociación de Investigación en Visión y Oftalmología (AIVO)

Título

Fecha

Buenos Aires, 7 y 8 de noviembre de 2014

Texto

Revisión

X Congreso nacional de la Asociación de Investigación en Visión y Oftalmología (AIVO)
Buenos Aires, 7 y 8 de noviembre de 2014

RESÚMENES DE INVESTIGACIONES PRESENTADAS

Concordancia entre pruebas de biomecánica corneal y tomografía Scheimpflug en la detección de queratoconos

Ruiseñor Vázquez PR^a,b, Galletti JD^a,b, Minguez N^a,b, Delrivo M^a, Fuentes Bonthoux F^a, Pförtner T^a, Galletti JG^a,c

^aLaboratorio ECOS (Estudios Clínicos Oculares), Buenos Aires.
^b Hospital de Clínicas José de San Martín, Buenos Aires
^c Instituto de Medicina Experimental, Academia Nacional de Medicina-CONICET, Buenos Aires
pablor_04@hotmail.com

Objetivos. Evaluar la concordancia entre la tomografía Scheimpflug y el analizador de respuesta ocular (ORA) en las pruebas de córneas topográficamente normales para la detección de queratocono.
Métodos. Series de casos de 206 ojos de 206 candidatos a cirugía refractiva evaluados con topografía corneal para su inclusión y luego analizados con tomografía Scheimpflug (Pentacam) y examen de biomecánica corneal. Las medidas principales fueron los índices del Pentacam para detección de ectasia (Df, Db, Dp y D, valor de corte ≥ 1.6) y combinaciones previamente validadas de mediciones de ORA (DifCRF y LF2).
Resultados. La edad media fue de 32,5 ± 8,0 años y el 43% de los sujetos eran varones. La tasa de positivad (%) para cada índice fue Df 16,5, Db 5,3, Dp 10,2, D 21,8, DifCRF 30,6 y LF2 20,4. La concordancia (ambas pruebas positivas o negativas) fue
62,1% para D y DifCRF, el 68,4% de D y LF2, 66% para Dp y DifCRF y 76,2% para Dp y LF2. Sólo los casos doblemente positivos para D-LF2 y Dp-LF2 tu- vieron aberraciones de alto orden significativamente más altas que sus contrapartes doblemente negativos (p <0,01). LF2 alcanzó mayor concordancia con Dp (86,9%) y D (76,2%) con un punto de corte >0,7 y al mismo tiempo los índices Dp y D tuvieron mayor concordancia con LF2 (89,3% y 86,4%, respectiva- mente) con un punto de corte ≥ 2,0.
Conclusiones. La alta sensibilidad para la detección de ectasia por un único método se obtiene a costa de una reducción de la especificidad. La concordancia entre las pruebas de ORA y la tomografía Scheimpflug Pentacam es clínicamente aceptable, pero hay posibilidades de reducir la tasa de falsos positivos mediante la combinación de ambas tecnologías con criterios diagnósticos modificados.

Efecto de la contaminación aérea urbana en queratitis estromal herpética en ratón

Caballero LM^a, Zapata GL^a, Tau Ja, Zaccagnini G^a, Illian HE^b; Zárate, JO^a, Berra A^a.

^a Laboratorio de Investigaciones Oculares, Departamento de Patología, Facultad de Medicina, Universidad de Buenos Aires
^a Servicio de Neurovirosis, Departamento de Virología, Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas (INEI), Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud (ANLIS) Dr. Carlos Malbrán, Buenos Aires.
lilicaballero@hotmail.com

Introducción. La queratitis estromal herpética (QEH) es una enfermedad de diagnóstico frecuente en oftalmología a nivel mundial. Si no se la trata de manera adecuada conduce a ceguera corneal.
Objetivo. Estudiar los efectos de la contaminación aérea urbana sobre un modelo de QEH en ratón.
Métodos. Para desarrollar el modelo de QEH se realizó una queratectomía en gradilla y posteriormente se infectó la córnea derecha de ratones Balb/C de 6-8 semanas de edad con 5 μl de una solución de Herpes virus simple tipo I (HVS-1) 1x107 PFU/μl. Un grupo de ratones (n=24) nació en el rack con contaminación aérea proveniente de la calle Uriburu 950, Buenos Aires (grupo CC). Otro grupo de ratones (n=25) fue colocado en el rack de contaminación aérea luego de ser infectado (grupo CA). El tercer grupo (n=28) fue colocado en el rack sin contaminación aérea (grupo LC). Se mantuvo a los ratones en los racks durante 14 días, contando como día 0 el día de la infección. Se los evaluó clínicamente a los 7, 10 y 14 días. Además se tomaron muestras de superficie ocular para medir citoquinas pro-inflamatorias como TNF-α y MCP-1 por la técnica de ELISA y cuantificar la presencia de HSV-1 por la técnica de Real Time PCR.
Resultados. Los ratones CC presentaron mayor severidad clínica, resultando significativamente estadísticos (p<0,05) los niveles de opacidad corneal al día 7 (p=0,001) y al día 10 (p=0,001) y los niveles de neo- vascularización al día 10 (p=0,03) y 14 (p=0,02) en los ratones CC con respecto de los ratones LC. Los niveles obtenidos de citoquinas pro-inflamatorias resultaron significativamente mayores en los ratones CC, tanto para TNF-α (p=0,01) como para MCP-1 (p= 0,005) con respecto del grupo LC. La mayor concentración de HSV-1 resultó ser en los ratones expuestos a contaminación aérea al día 5, obteniéndose los siguientes valores de Ct = 24,16; 24,93 y 28,44 para los ratones CC, CA y LC respectivamente.
Conclusiones. El grupo de ratones expuestos a la contaminación aérea urbana desde su nacimiento (grupo CC) presentó mayor sintomatología de la QEH, secreción de citoquinas pro-inflamatorias y cantidad de virus. Por lo tanto, se podría inferir que el tiempo de exposición a la contaminación aérea urbana estaría relacionado con una mayor sensibilidad a infecciones virales en la superficie ocular.

Aldehído deshidrogenasa 1A1 encórnea de cobayos: características moleculares y localización tisular

Suárez MF,^a Correa L^b, Espósito E^b, Insfrán C^a, Urrets-Zavalía JA^b, Serra HM^a.
a Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología (CIBICI)-CONICET, Facultad de Ciencias Químicas, Universidad Nacional de Córdoba.
b Departamento de Oftalmología, Clínica Universitaria Reina Fabiola, Universidad Católica de Córdoba.
mf.suarez10@gmail.com

Objetivos. Queratopatía climática esferoide (QCE) es una enfermedad degenerativa de la córnea humana caracterizada por la agregación de proteínas bajo el epitelio y una progresiva opacidad corneal, causada por condiciones ambientales desfavorables. En el intento por desarrollar un modelo experimental de QCE estudiamos el efecto de agentes antioxidantes en la córnea de cobayos normales y de cobayos expuestos a radiación UV (RUV). Dado que aldehído deshidrogenasa 1A1 (ALDH1A1) contribuye a la protección contra el estrés oxidativo, decidimos estudiar los aspectos moleculares y la localización de esta enzima en la córnea de cobayos normales.
Métodos. Se emplearon homogenato de córnea total, así como extracto de epitelio, estroma y endotelio de cobayos. La expresión de ALDH1A1 se estudió mediante inmunoblotting e inmunofluorescencia, y la existencia de isoformas para esta enzima se determinó mediante isoelectroenfocado.
Resultados. ALDH1A1 en la córnea de cobayos presenta algunas características únicas con respecto de otros mamíferos. Esta enzima tienen un peso molecular de aproximadamente 54 kDa, al igual que otra de las cristalinas presentes en córnea (ALDH3A1), caracterizada molecularmente en forma previa por nuestro grupo de trabajo en células epiteliales de córnea de cobayos normales. Los estudios de isolectroenfocado de ALDH1A1 revelaron la existencia de una única isoenzima con un pI de aproximadamente 9 a dife- rencia de las dos isoformas de la enzima ALDH3A1. Los estudios de inmunofluorescencia demostraron que estas dos enzimas (ALDH1A1 y ALDH3A1) se expresan en células epiteliales, queratocitos y células endoteliales de la córnea.
Conclusiones. En este trabajo identificamos y caracterizamos molecularmente por primera vez la enzima ALDH1A1 en los diferentes compartimentos celulares de la córnea de cobayos normales. Además describimos su localización tisular y la comparamos con la localización de la otra cristalina (ALDH3A1).

Efecto de proteína de fusión PF-MC, inhibidora del factor nuclear kappa b en un modelo de neovascularización corneal en ratas

Salica JP^a; Chuluyan HE^b, Guerrieri D^b, Ortiz G^a, Gallo JEa
^a Nanomedicine & Vision Group, Facultad de Ciencias Biomédicas, Universidad Austral, Pilar, prov. de Buenos Aires.
^b Cátedra de Farmacología, Facultad de Ciencias Médicas, Universidad de Buenos Aires.
jp.salica@gmail.com

Objetivos. Evaluar el efecto de PF-MC (proteína de fusión de SLPI-cementoín) en modelos de inflamación y neovascularización corneal en ratas.
Métodos. Se realizó una lesión con álcalis en la córnea derecha de 48 ratas bajo anestesia inhalatoria con isoflurano, utilizando papel de filtro de 3 mm con- teniendo 1 mol/L NaOH durante 40 segundos. Se administró tópicamente 10 μl de SLPI (20ug; n=12), PF-MC (2ug; n=12) o vehículo (n=12) cuatro veces al día durante siete. Hubo un cuarto grupo formado por ojos no lesionados. Los animales se sacrificaron en el día 3 y 7. Dos investigadores distintos evaluaron macroscópicamente el tiempo de epitelización corneal e histológicamente el número de PMN, la cantidad de células en el estroma corneal, la extensión y la profun- didad de vasos. Por inmunohistoquímica se evaluó el anticuerpo primario VEGF.
Resultados. El tiempo de epitelización corneal, el número total de células en el estroma corneal, la presencia de macrófagos y la extensión de neovasos fueron significativamente menores en las córneas tratadas con PF-MC comparadas con otros grupos animales (p<0.05). Se evidenció disminución de inmunorreactividad a VEGF en las ratas tratadas con PF-MC.
Conclusiones. PF-MC demostró efecto antiinflamatorio y antiangiogénico hasta los 7 días de tratamiento. Se debe continuar investigando para determinar el posible beneficio de utilizar este agente en oftalmología.

Ruptura de la tolerancia inmunológica conjuntival en el ojo contralateral en respuesta a la quemadura corneal por álcali: ¿otro fenómeno ocular simpático?

Keitelman IA^a; Guzman M^a; Sabbione F^a; Giordano MN^a; Trevani AS^a,b, Galletti JG^a

^a Instituto de Medicina Experimental (IMEX)-CONICET, Academia Nacional de Medicina, Buenos Aires.
^b Departamento de Microbiología e Inmunología, Facultad de Medicina, Universidad de Buenos Aires.
irenekeitelman@hotmail.com

Objetivos. Estudiar el efecto que una lesión corneal en un ojo ejerce sobre la respuesta inmune conjuntival del ojo contralateral y los potenciales mecanismos involucrados.
Métodos. Modelo murino (Balb/c) de lesión corneal unilateral con NaOH (día 1) con instilación ocular diaria homo o contralateral de ovalbúmina (OVA) (días 2-5). Luego, inmunización subcutánea con OVA y adyuvante (día 8) para evaluar la respuesta T resultante como reacción de hipersensibilidad retardada (DTH) inducida por OVA inyectada en la almohadilla plantar (día 15). Para estudiar el drenaje linfático se inyectó OVA fluorescente en el espacio subconjuntival de un ojo y a las dos horas cada ganglio linfático cervical se evaluó por separado.
Resultados. En comparación con los ratones no tratados, la instilación de OVA previa a la inmunización redujo la respuesta de la DTH (p<0,05), mientras que la instilación luego de la quemadura corneal con álcali no produjo reducción significativa de la DTH ni en el ojo lesionado ni en el contralateral. En cuanto al drenaje linfático se detectó aumento significativo de la intensidad mediana de fluorescencia en las células de los ganglios cervicales submandibulares y preauriculares homolaterales (p<0,001) pero no en los contralaterales. Sin embargo, hubo una activación estadísticamente significativa de las células T en los ganglios linfáticos ipsi y contralaterales 48 horas luego de la lesión corneal (p<0,05).
Conclusiones. Una lesión corneal unilateral intensa es suficiente para afectar el balance inmunológico del ojo contralateral, a pesar de la ausencia de un daño químico directo o drenaje linfático cruzado. Sin embargo, se detecta activación de células T en los ganglios linfáticos opuestos. Estos resultados están en línea con otros desórdenes oculares que son sensibles a la sección de filetes corneales o a la simpatectomía cervical.

Estudio comparativo entre queratopatía climática esferoidea, pinguécula y pterigión en una región aislada de la Patagonia argentina

Espósito E^a, Correa LJ^a, Suárez MF^b, Crim N^b, González Castellanos ME^a, Martinez Da, Serra HM^b, Urrets-Zavalía JA^a
^a Departamento de Oftalmología, Clínica Universitaria Reina Fabiola, Universidad Católica de Córdoba
^aCIBICI-CONICET, Facultad de Ciencias Químicas, Universidad
Nacional de Córdoba.
Los dos últimos autores contribuyeron de manera similar en esta investigación.
gely_e@hotmail.com.

Objetivos. Estudiar prevalencia de queratopatía climática esferoide (QCE), pinguécula y pterigión en una población aislada de la Patagonia argentina y la posible correlación entre ellas. Los mecanismos moleculares involucrados en sus fisiopatogenia permanecen desconocidos. Varios estudios muestran asociaciones entre estas patologías y la exposición a la radiación ultravioleta (RUV).
Métodos. Se examinaron con examen oftalmológico completo al azar 159 pacientes del departamento El Cuy, provincia de Rio Negro. Se realizó el análisis estadístico con InfoStat (2014). Los estudios comparativos se realizaron con el test de Student, Chi2 Pearson y ANOVA. El valor de P<0.05 se consideró estadísticamente significativo.
Resultados. De los159 pacientes, el 52.83% (84) era masculino y el 47.17% (75) era femenino. La prevalencia de las patologías estudiadas fueron QCE 28.9% (46), pinguécula 32.1% (51) y pterigión 13.2% (21). Se constató una asociación entre QCE y sexo de los pacientes que es más frecuente en los hombres (21.4%) que en las mujeres (7.5%) y presenta una diferencia estadísticamente significativa (p=0.0007; Odds Ratio
3.57; IC95%1.69-7.52. Se determinó la media etaria de los pacientes con y sin QCE y fue 60.2 ± 10.8 para los enfermos con QCE y 50.9±15.8 sin QCE, constatando una diferencia significativa entre los dos grupos (p=0.0001). Para pinguécula y pterigión no se pudo establecer asociación estadística entre dichas enfermedades y el sexo de los individuos (p= 0.22 y p=0.67 respectivamente) ni con la edad (p=0,35 y p=0,57 respectivamente). No se encontraron diferencias significativas en la asociación de QCE con Pinguécula y QCE con pterigión p=0.92 y p=0.63, respectivamente.
Conclusiones. Se encontró una alta prevalencia de QCE, pterigión y pinguécula. Por otro lado también encontramos pacientes que símultáneamente tenían QCE con pinguécula, otros que presentaban QCE con pterigión, y otros, pinguécula y pterigión únicamente. Esta investigación confirmaría que además de los elementos ambientales existirían otros factores involucrados en la inducción de estas tres enfermedades.

Análisis de asimetría corneal con tomografía Scheimpflug Pentacam para la detección de queratocono

Galletti JD^a,b, Ruiseñor Vázquez PR^a,b, Delrivo MA^a, Minguez N^a,b, Fuentes Bonthoux F^a, Pförtner T^a, Galletti JG^a,c

^aLaboratorio ECOS (Estudios Clínicos Oculares), Buenos Aires.
^b Hospital de Clínicas José de San Martín, Buenos Aires
^cInstituto de Medicina Experimental, Academia Nacional de Medicina-CONICET, Buenos Aires.

jonagalletti@yahoo.com.ar

Objetivos. Evaluar la asimetría corneal como un método diagnóstico para queratocono.
Métodos. Se compararon las diferencias de los pará- metros corneales de tomografía Scheimpflug (Pentacam, Oculus Optikgerate GmbH, Wetzlar, Alemania) entre el grupo control y pacientes con queratocono y se combinaron para mejorar el campo diagnóstico. La sensibilidad y la especificidad se calcularon por me- dio de curvas de característica operativa del receptor (ROC)
Resultados. Dentro del grupo control (n=57), la asimetría corneal para todas las variables corneales no fue mayor en pacientes anisometrópicos, pero resultó significativamente aumentada (p < 0.05) en pacientes con queratocono (n=66), salvo por el párametro Dy. La especificidad de la asimetría corneal resultó mayor que la sensibilidad para todas las variables. Un modelo de asimetría combinado que considera cuatro pará- metros corneales (queratometría anterior promedio, paquimetría del ápex, índice de progresión paquimétrica mínimo y elevación posterior en el punto más delgado) mostró 71.2% de sensibilidad y 93.0% de especificidad, mientras el índice corneal más sensible (índice de espesor relacionado de Ambrosio), cuando se lo consideró en forma individual para cada ojo, obtuvo 69.7% de sensibilidad y 96.5% de especificidad en este análisis.
Conclusiones. La asimetría corneal es poco común en ojos normales, por lo tanto su especificidad es alta para la detección de queratocono, pero su sensibilidad es moderada cuando se consideran parámetros aislados. Un enfoque combinado puede incrementar la sensibilidad y podría servir para discriminar pacientes con verdadero queratocono de aquellos casos falsos positivos que surgen en la práctica clínica cuando se examinan índices corneales por separado.

Implantacion de iMvalv: estudio exploratorio en conejos

Torres RM^a,b, Guarnieri FA^b

^a Laboratorio BioMEMS, Facultad de Ingeniería, Universidad
Nacional de Entre Ríos. Oro Verde.
^b Centro de Ojos Dr. Lódolo, Paraná, prov. de Entre Ríos.
romator7@gmail.com

Objetivos. Implantar un nuevo prototipo de un dispositivo (iMvalv) para el drenaje de humor acuoso en conejos y evaluar parametros clínicos, quirúrgicos e histológicos.
Métodos. Se utilizaron cinco conejos neocelandeses que, tras recibir anestesia general y tópica, fueron operados de su ojo derecho. Se utilizó un microscopio quirúrgico portátil e instrumental de cirugía oftálmica para realizar una técnica similar al implante valvular en humanos. Se tomó la presión intraocular a ambos ojos previamente y a las 24 horas, 7, 21 y 50 días (tonómetro de aplanación Perkins). En esos mismos lapsos se evaluaron aspectos clínicos postoperatorios. Se mantuvieron durante 10 días tras la cirugía con gotas de antibióticos y corticoides (4 por día). Al terminar el estudio, tras eutanasia, los ojos operados se enuclearon y se realizó estudio histológico de la región del implante.
Resultados. El primer ojo donde se realizó el implante presentó una cirugía complicada y a las 24 horas se observó extrusión del tubo. Con nuevo instrumental, al otro día se realizaron las cuatro cirugías restantes, presentándose un buen postoperatorio hasta el día de la eutanasia. La PIO en los ojos operados fue de 2 a 3 mmHg a los diferentes tiempos, con 5 a 6 mmHg en el cotralateral, salvo un animal que tuvo 6 mmHg en el ojo operado a las 24 horas y que disminuyó a 3 mmHg a la semana. El estudio histológico del área del implante mostró reacción tisular de cuerpo extraño en todos los ojos.
Conclusiones. Se realizó exitosamente el implante de un prototipo de iMval en cuatro de cinco ojos que se mantuvieron por 50 días con presiones más bajas que el ojo contralateral y presentaban cambios histológicos similares a los que se describieron por implantes valvulares en humanos.

La hiperosmolaridad de la película lagrimal interrumpe la tolerancia inmune de la superficie ocular: ¿un disparador potencial del ojo seco?

Guzmán M, Keitelman IA, Sabbione F, Trevani AS, Giorda no MN, Galletti, JG.
Instituto de Medicina Experimental (IMEX), Academia Nacional de Medicina-CONICET, Buenos Aires. mauricioguzman88@gmail.com

Objetivos. Evaluar la tolerancia inmune conjuntival en un modelo murino de estrés hiperosmolar.
Métodos. Ratones Balb/c hembras de 8-12 semanas de edad se instilaron con solución salina isosmolar (0,3 Osm) o hiperosmolar (3 Osm) en ambos ojos, tres veces al día durante cinco. En los días 4 y 5 se añadieron inoculaciones de ovoalbúmina (OVA) en ambos ojos, tres veces por día. Después de la inmunización subcutánea con OVA en adyuvante (día 8) se midió la inducción de la respuesta de células T en un ensayo de hipersensibilidad retardada (DTH) en la almohadilla plantar (día 15). En algunos experimentos, las células T de nódulos linfáticos (5 días) se evaluaron por citometría de flujo. Los sobrenadantes de las células epiteliales Pam 212 expuestas a medio isosmolar o hiperosmolar se ensayaron en un ensayo de fagocitosis con la línea celular de macrófagos Raw 264.
Resultados. En comparación con los ratones inmunizados no inoculados, los que se inocularon con OVA desarrollaron menores respuestas de DTH, al igual que el grupo instilado con solución isosmolar y OVA (p<0.05). Por el contrario, los ratones instilados con solución salina hiperosmolar y OVA exhibieron respuestas de DTH completas. En este último, las células T de los ganglios linfáticos drenantes mostraron un aumento en la expresión de marcadores de activación (CD69, CD25) y marcadores de memoria (CD44). Los sobrenadantes de células Pam 212 expuestas a medio hiperosmolar durante 4 horas —pero no los expuestos a medio control— incrementaron la actividad fagocítica de la línea celular de macrófagos, similar al control al cual se agregó lipopolisacárido.
Conclusiones. La hiperosmolaridad de la película lagrimal es suficiente para disminuir la tolerancia conjuntival hacia un antígeno inocuo en ratones Balb/c. Es probable que se derive del aumento de las condiciones proinflamatorias que ejerce sobre el epitelio conjuntival.

Las células horizontales y la luz en la retina de pollo: un nuevo participante en el sistema fotorreceptivo

Morera LP, Díaz NM, Guido ME
Centro de Investigaciones en Química Biológica de Córdoba (IQUIBIC)-CONICET, Departamento de Química Biológica, Facultad de Ciencias Químicas, Universidad Nacional de Córdoba. lmorera@fcq.unc.edu.ar

Objetivos. Las células ganglionares de la retina (CGR) que expresan el fotopigmento melanopsina (OPN4) son intrínsecamente fotosensibles. En la retina de pollo se describieron dos genes de OPN4, Op- n4x y Opn4m. Se demostró que la expresión de Op- n4m se limita solo a la capa de CGRs, mientras que la marca para Opn4x a partir del E15 aparece principalmente en células horizontales (CHs). El objetivo de este trabajo fue obtener cultivos primarios enriquecidos y caracterizar la posible fotonsensibilidad de estas interneuronas.
Métodos. Se disgregaron retinas de embriones de pollo de E15 y se sometieron a un gradiente discontinuo de 1% al 4% de albúmina de suero bovino (BSA). Las células recolectadas de las diferentes fases se cultivaron durante 4 días y se caracterizaron por inmunoquímica y morfología celular. Las fases se examinaron con anticuerpos específicos contra Opn4x, marcadores de CHs y marcadores para otras poblaciones de células de la retina. Además, los cultivos primarios se analizaron por RT-PCR. Finalmente los cultivos de CHs se expu- sieron a la luz para evaluar su fotosensibilidad.
Resultados. Sólo la fracción del gradiente correspondiente al 2,5% de BSA contuvo el mayor porcentaje de CHs. La inmunoreactividad de Opn4x se observó en los cultivos de las células provenientes tanto de la fase 2,5% como en los cultivos inmunopurificados contra Opn4x. El análisis por RT-PCR evidenció la presencia de transcriptos correspondientes a marcadores específicos de HCs. A través de Imaging de Calcio demostramos la fotosensibilidad intrínseca de las CHs.
Conclusiones. Por medio de este método separamos selectivamente CHs y logramos cultivos altamente enriquecidos en estas células que expresan el fotopigmento OPN4x y aportamos los primeros indicios acerca de su fotosensibilidad.

Rol del sistema de señalización de hormonas tiroideas en la proliferación y diferenciación celular durante el crecimiento y la regeneración retinal de zebrafish adulto

Bejarano CA^a,c, Faillace MP^a,b
^a Departamento de Fisiología y Biofisíca, Facultad de Medicina, Universidad de Buenos Aires
^b Instituto de Fisiología y Biofísica (IFIBIO)-CONICET, Facultad de Medicina, Universidad de Buenos Aires.
^cInstituto de Química y Físicoquímica biológicas (IQUIFIB)-CO- NICET, Facultad de Farmacia y Bioquímica, Universidad de Buenos Aires.
cbejarano@fmed.uba.ar

Objetivos. Estudiar el rol de las hormonas tiroideas (TH) y sus receptores (TRs) en los procesos de proliferación y diferenciación neuronal tanto en el crecimiento como la regeneración de la retina de pez cebra (Danio rerio) adulto.
Métodos. Se lesionaron las retinas de los peces cebra (ZF) con una inyección intravítrea única de ouabaína (OUA) y el control con una inyección de solución salina. Se separaron los animales en cuatro grupos y se trataron con TH (300 μg/L) o con vehículo (NaOH) en el agua de la pecera hasta los 8 (8 dpi) o 60 días pos lesión (60 dpi). Los peces se mantuvieron en un ciclo diario de 14 h de luz y 10 h de oscuridad. Se procedió a la eutanasia de los peces a los 8 o 60 dpi. Los grupos de 8 dpi recibieron un pulso de BrdU 24 horas previas a la eutanasia.
Se realizó inmunofluorescencia simple y doble para detectar diferentes poblaciones retinales sobre cortes. Se detectaron los niveles de ARNm de los TRs en la retina mediante las técnicas de RT-PCR estándar y cuantitativa.
Resultados. Se observó un incremento significativo de células inmunorreactivas para BrdU en los grupos lesionados y no lesionados tratados con TH a los 8 dpi (correspondiente al pico de proliferación celular). En el tratamiento a largo plazo con TH (60 dpi) se observó una disminución significativa en el número de células bipolares (BCs) en el grupo de ZF previamente lesionados. También se evidenciaron cambios morfológicos en las BCs en los lotes tratados con TH respecto de los grupos controles. Se describió la expresión del ARNm de las diferentes isoformas de TRs en la retina de ZF bajo los diferentes tratamientos descriptos.
Conclusiones. El sistema de señalización de las TH regula los procesos de proliferación y diferenciación tanto en la regeneración como en el proceso de crecimiento del tejido retinal.

Efectos de la exposición constante a luz de baja intensidad: modelo de degeneración retinal en ratas

Benedetto MM^a, Quinteros Quintana ML^a,b, Guido ME^a, Contin MA^a

^a CIQUIBIC-CONICET, Departamento de Química Biológica, Facultad de Ciencias Químicas, Universidad Nacional de Córdoba. ^b Laboratorio de Procesamiento de Señales, Facultad de Ciencias Exactas, Físicas y Naturales, Universidad Nacional de Córdoba. benedettomm@gmail.com

Objetivos. Estudiar la evolución temporal y los mecanismos de muerte que ocurren durante la degeneración retinal producida por la exposición constante a luz de baja intensidad.
Métodos. Se expusieron ratas albinas Wistar de 3 meses de edad a luz LED blanca fría de 200 lux de intensidad durante 7 días. Los animales control se mantuvieron en ciclos de luz (200 lux)/oscuridad (0 lux) de 12hs/12hs o en ciclos de oscuridad constante. Las muestras de retina se aislaron para determinar ciertos parámetros como: ancho de la capa nuclear externa, índice apoptótico, expresión y actividad enzimática de caspasa-3, expresión, localización y nivel de fosforilación de rodopsina y estrés oxidativo.
Resultados. Los resultados muestran que la exposición constante a luz blanca LED de baja intensidad produce —tanto en machos como en hembras— la reducción de la capa nuclear externa perteneciente a conos y bastones, que resulta significativa respecto de los controles luego del séptimo día de exposición. Además, se encontró que la muerte de las células fotorreceptoras es por un mecanismo independiente de caspasa-3. El análisis de rodopsina demostró que tanto la expresión como la localización de esta proteína no están alteradas a lo largo de los días de exposición a luz; sin embargo, hay mayor proporción de rodopsina fosforilada en ser334 respecto de los grupos control. Debido a que el estrés oxidativo se considera una de las causas principales en ciertas degeneraciones retinales, se decidió evaluar el contenido de especies reactivas derivadas del oxígeno mediante un ensayo con DHE (2’7’-dihidroxietidio) y la actividad de la enzima antioxidante catalasa. Ambos análisis revelaron que no existen diferencias significativas entre los grupos experimentales y los controles.
Conclusiones. Basados en estos resultados concluimos que el daño retinal por exposición constante a luz de baja intensidad puede ser un modelo útil para estudiar los mecanismos de degeneración retinal producidos por la activación constante del proceso de fototransducción.

Las células gliales de Müller expresan MMP-2 en la retina en condiciones de hipoxia

Lorenc VE^a, Ferrer DG^a, Luna Pinto JD^b, Sánchez MC^a
^a Departamento de Bioquímica Clínica, Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología (CIBICI), Facultad de Ciencias Químicas, Universidad Nacional de Córdoba.
^bClínica de Ojos Romagosa, Fundación Ver, Córdoba. vlorenc@fcq.unc.edu.ar

Objetivos. Tanto la proliferación como la migración celular son eventos clave durante el proceso de neo- vascularización (NV) que presentan diferentes enfermedades isquémicas retinales como la retinopatía del prematuro (ROP) y la retinopatia diabética proliferativa (RDP). Estos eventos se encuentran directamente asociados con una excesiva proteólisis de MEC, siendo las metaloproteinasas las principales enzimas involucradas. IGF-1, entre otros factores, está involucrado en la NV y resultados in vitro de nuestro laboratorio demostraron la regulación que ejerce este factor sobre la actividad de MMP-2 en las células gliales de Müller. En este trabajo nos propusimos evaluar en un modelo in vivo la expresión y distribución de MMPs en la retina asociada al proceso de NV.
Métodos. Se utilizó un modelo de retinopatía inducida por oxígeno (OIR) en donde ratones C57BL6 expuestos a una etapa de hiperoxia y luego de hipoxia relativa se sacrificaron en distintos días posnatal P12, P17 y P26. A estos tiempos se procedió a evaluar en homogenatos retinales la expresión de MMP-2 y MT1-MMP por ensayos de Western blot así como la distribución de MMP-2 en criocortes y flatmount retinales por ensayos de inmunofluorescencia.
Resultados. Por ensayos de Western blot se observó expresión diferencial de MMP-2 y MT1-MMP en homogenatos retinales de animales OIR respecto de animales control (mantenidos en aire). En criocortes de animales control, MMP-2 se observó en la membrana limitante interna (MLI), en la capa plexiforme interna (CPI) y en la capa nuclear interna (CNI) mientras que en animales OIR, MMP-2 se observó en las mismas capas antes mencionadas pero con mayor intensidad en la MLI. En ambas condiciones MMP-2 se expresó por células GS positivas incrementando el nivel de expresión en los animales OIR. En flatmounts obtenidos de animales OIR nuevamente observamos que MMP-2 fue expresada por células GS positivas en áreas cercanas a los vasos del plexo vascular superficial.
Conclusiones. Estos resultados demuestran que MMP-2 se expresa preferencialmente en áreas de la MLI, en los endfeet de las células de Müller, proponiendo a esta célula como principal responsable de esta expresión.

Resultados anatómicos luego de la cirugía por desprendimiento de retina regmatógeno en una muestra argentina

Iezzi La, Francos JP^b, Galletti JG^a

^aInstituto de Medicina Experimental, Academia Nacional de Medicina-CONICET, Buenos Aires.
^b Hospital de Clínicas José de San Martín, Universidad de Buenos
Aires. iezzi.laura09@gmail.com

Objetivos. Evaluar resultados anatómicos y factores asociados en cirugías por desprendimiento de retina regmatógeno (DDR) en una muestra argentina.
Métodos. Revisión retrospectiva de historias clínicas de pacientes intervenidos por el mismo cirujano en cuatro centros. El resultado anatómico se definió como éxito si la retina se mantuvo aplicada completamente luego de la extracción del taponamiento; como fracaso, en caso contrario; y no se consideraba operable o indeterminado si se mantenía el taponamiento o se requería otra cirugía al cierre del estudio.
Resultados. Se recolectaron 68 casos operados entre septiembre 2012 y septiembre 2014, tres de los cuales abandonaron el seguimiento y no se analizaron. La edad media fue 66 años (33 a 97), siendo el 42% mujeres y 45% ojos fáquicos. En promedio, los pacientes demoraron 7 días (0 a 180) en consultar desde el primer síntoma de DRR, realizándose la primera cirugía a los 7 días de consultar (0 a 40). El 71% ingresó al quirófano con la mácula desprendida, el 17% con un cuadrante desprendido y el 32% con 4 cuadrantes desprendidos. La técnica quirúrgica fue 1% retino- pexia neumática, 20% cerclaje escleral, 71% vitrectomía y 8% vitrectomía+cerclaje. Se realizó una cirugía en el 65%, dos cirugías para el 23% y tres cirugías para el 12% de los casos, con 62% de éxito, 10% de fracaso y 28% de estado indeterminado. Las variables correlacionadas negativamente con el éxito fueron, en carácter decreciente: el grado de proliferación vitreorretinal (PVR), el número de cuadrantes afectados, el tiempo hasta la cirugía y la afectación de cuadrantes inferiores.
Conclusiones. Si bien los factores relacionados con la enfermedad son similares a los publicados internacionalmente (siendo la PVR casi determinante), la tasa de éxito más baja según tipo de procedimiento muestra que hay matices locales que podrían estar relacionados con el sistema de salud argentino.

Fotoisomerización reversa del todo-trans retinal en cultivos primarios de células ganglionares de retina de pollo

Díaz N^a, Morera L^a, Tempesti T^b, Baumgartner MT^b, Guido ME^a
^a Centro de Investigación en Química Biológica de Córdoba (CI- QUIBIC)-CONICET, Facultad de Ciencias Químicas, Universidad Nacional de Córdoba.
^b Instituto de Investigaciones en Fisicoquímica de Córdoba (IN- FIQC), Facultad de Ciencias Químicas, Universidad Nacional de Córdoba.
ndiaz@fcq.unc.edu.ar

Objetivos. En estudios anteriores hemos demostrado la presencia de células ganglionares intrínsecamente fotosensibles (ipRGCs) que expresan el fotopigmento melanopsina (OPN4) en retina de pollo. Además, hemos encontrado que la retina interna del pollo tiene la capacidad de síntesis de 11-cis retinal de una manera dependiente de la luz. En el presente estudio se determinó la capacidad de los cultivos primarios de células ganglionares de la retina (RGC) a partir de todo-trans retinal del medio y para isomerizarlos por medio de luz.
Métodos. Los cultivos de RGC se obtuvieron por inmunopanning de retina embrionaria de pollo de día 8 con un Anticuerpos OPN4X para aumentar la cantidad de ipRGCs. Después de esto, las células se irradiaron con luz blanca o se mantuvieron en oscuridad. Los retinoides se extrajeron y se analizaron por HPLC.
Resultados. Los cultivos primarios obtenidos expresan diferentes marcadores neuronales con una morfología típica RGC para mostrar procesos largos después de 4 días. Otros tipos de células de la retina no se detectaron de manera significativa en los cultivos. Las células se alimentaron con todo-trans retinal 3 horas y se expusieron a un pulso de luz de 1 h, se encontraron niveles detectables de 11-cis retinal en los cultivos por HPLC.
Conclusiones. Como habíamos informado anterior- mente en la retina interna del pollo, los cultivos de RGC exhiben la capacidad de isomerización 11-cis retinal a partir de todo-trans retinal bajo la estimulación de luz. Esto sugiere fuertemente la presencia de una actividad fotoisomerasa en estas células.

La esfingosina-1-fosfato promueve la supervivencia de los fotorreceptores en la retina activando la vía de ERK/MAPK

Prado Spalm FH^a,b, Simón MV^a,b, Agnolazza DLb, Vera MS^a, Politi LE^a,b, Rotstein NP^a,b
^a Instituto de Investigaciones Bioquímicas Bahía Blanca (INIBIBB)
^bUniversidad Nacional del Sur, Bahía Blanca. facu_prado@hotmail.com

Objetivos. La muerte por apoptosis de las neuronas fotorreceptoras de la retina es una característica común a la mayoría de las degeneraciones retinales. Determinar qué moléculas previenen esa muerte y sus mecanismos de acción contribuiría a identificar nuevos blancos terapéuticos para el tratamiento de estas enfermedades. Nuestro laboratorio identificó a un esfingolípido —la esfingosina-1-fosfato (S1P)— como una señal clave para regular la supervivencia, proliferación y diferenciación de los fotorreceptores. La S1P puede actuar como segundo mensajero o activando a receptores de membrana (S1PR) acoplados a proteína G. En este trabajo investigamos qué vías de señalización activa la S1P para prevenir la apoptosis de los fotorreceptores inducida por daño oxidativo.
Métodos. Los cultivos neuronales puros de retina de rata se trataron con o sin S1P antes de inducir photoreceptor survival by activating the ERK/MAPK pathway daño oxidativo con H2O2 o con el oxidante paraquat (PQ). Para evaluar si la S1P activaba a S1PR, se investigó la presencia de estos en las neuronas y se las trató con BML-241, antagonista de S1PR3, antes del agregado de S1P. Para establecer qué vías intracelulares activaba S1P, los cultivos se trataron con PD98059 o con LY294002, inhibidores de la vía de ERK/MAPK y PI3K, respectivamente, previo al agregado de S1P y H2O2
Resultados. La S1P disminuyó la apoptosis de los fotorreceptores inducida por daño oxidativo. Los fotorreceptores expresaron los subtipos S1P2 y S1P3 de S1PR y la presencia de un antagonista de S1P3 inhibió el efecto protector de S1P frente al daño oxidativo. El agregado de PD98059 también inhibió la protección antiapoptótica de S1P y estudios de Western blot mostraron que S1P aumentó rápidamente los niveles de P-ERK; por el contrario, LY294002 no modificó la protección de S1P.
Conclusiones. La S1P activaría a S1P3 y, río abajo, a la vía de ERK/MAPK para promover la supervivencia de los fotorreceptores.

Localización subcelular y neuroplasticidad de la proteína clp36 en conos

Fosser NS, Paganell AR, Ríos H.

Instituto de Biología Celular y Neurociencias Prof. E. De Robertis, Facultad de Medicina, Universidad de Buenos Aires. nfosser@fmed.uba.ar

Objetivos. Estudiar la localización de la proteína CLP36. Se trata de una proteína de la familia PDZ- LIM, asociada con el citoesqueleto. Esta proteína pertenece a la subfamilia ALP y presenta cuatro dominios que caracterizan de la subfamilia: uno C-terminal LIM, uno N-terminal PDZ, uno ALP y uno ZM por el que se asocia con la alfa-actinina y así a la actina. Nuestro laboratorio fue el primero en demostrar su localización en los conos de retinas de aves, así como en la capa plexiforme interna. Por otra parte, estamos interesados en estudiar las potenciales variaciones de esta proteína en diferentes condiciones de iluminación.
Métodos. La aparente localización subcelular de esta proteína nos hizo asociar su función con la maquinaria requerida por los conos para la liberación y la recaptación de los neurotransmisores. A través de inmunomicroscopía electrónica y microscopía confocal se determinó la ubicación de la proteína. Además se realizó inmunoprecipitación para poder definir su ubicación subcelular. Con la idea de analizar si esta proteína tenía un rol en los eventos de neuroplasticidad se diseñó un experimento en donde un grupo de animales fue criado en condiciones de hipoestimulación visual (0,2 lux) versus un grupo control (200 lux).
Resultados. Nuestra hipótesis es que la función de la proteína se encuentra relacionada con la maquinaria requerida por los conos para la liberación y la recaptación de los neurotransmisores. A través de inmunomicroscopía electrónica y microscopía confocal se determinó que la proteína se encuentra por debajo de la membrana plasmática del terminal —preferentemente en la periferia del terminal— aunque no necesariamente asociada a las proteínas de la cinta sináptica. La coexpresión de esta molécula fue parcial para la proteína sináptica SV2 y sinaptotagmina, pero coexpresa con actina en todo el terminal. La inmunoprecipitación de la proteína permitió además demostrar que se encuentra en la fracción sináptica 0,9 y 1,2 M de retinas de pollo, lo que per- mite confirmar que es una proteína estructural de los terminales sinápticos. Por otra parte, encontramos que CLP36 se encuentra disminuida en los animales criados bajo hipoestimulación visual.
Conclusiones. Analizadas las retinas por inmunomarcación y las fracciones sinápticas mediante inmunoprecipitación y Western blot pudimos concluir que CLP36 está involucrada en eventos plásticos en los fotorreceptores y estos posiblemente asociados a los eventos de recaptación mediado por vesículas recubiertas por otras proteínas como la clatrina.

Participación de mecanismos de autofagia en las retinopatías isquémicas de la retina

Subirada PV, Jaldin Fincati J, Lorenc VE, Paz MC, Sánchez MC

Departamento de Bioquímica Clínica, Facultad de Ciencias Químicas, Universidad Nacional de Córdoba.
psubirada@fcq.unc.edu.ar

Objetivos. Las retinopatías proliferativas son causa frecuente de ceguera irreversible y es la hipoxia el principal responsable de las alteraciones vasculares y degeneración neuronal. El concepto de autofagia como mecanismo de defensa actualmente ha cobrado relevancia en estas enfermedades dado que es un proceso rápidamente activado bajo condiciones de hipoxia. Por lo cual el objetivo de este trabajo fue evaluar los efectos de hipoxia sobre la activación de autofagia en modelos retinales.
Métodos. Se utilizaron modelos experimentales in vitro e in vivo, los cuales consistieron en una línea inmortalizada de células gliales de Müller (CM), MIO-M1, así como retinas de ratones obtenidas del modelo de retinopatía inducida por oxígeno (OIR). Para los ensayos de hipoxia las células se cultivaron hasta una confluencia entre 50-60% y luego sometidas a condiciones de hipoxia, 0,3% O2, 4 horas en una incubadora diseñada para tal fin. Como control positivo se utilizaron células sometidas a cinética de ayuno en un medio mínimo, mientras que como con- trol negativo utilizamos CM cultivadas en normoxia (21% de O2). Los lisados celulares se evaluaron para expresión de diferentes proteínas de autofagia median- te técnicas de Western blot. Por otra parte las retinas de ratones del modelo OIR, así como sus respectivos controles de aire, se analizaron en el día posnatal P12 (fase de hiperoxia) y P17 (fase de hipoxia) por inmunofluorescencia para el marcador de autofagia LC3, así como para diferentes marcadores celulares y posteriormente analizadas por microscopía confocal FV300 (Olympus).
Resultados. La CM cultivadas durante 4 horas en hipoxia mostraron una acumulación de la proteína LC3 en los lisados totales. A su vez, las células MIO-M1 cultivadas en medio mínimo (condiciones de ayuno) mostraron vesículas positivas para LC3 proporcional al tiempo de ayuno. En el modelo in vivo observamos que las retinas provenientes del modelo OIR presen- taron vesículas LC3 positivas compatibles con autofagosomas a nivel de la capa nuclear interna (CM) y de células ganglionares respecto de animales control.
Conclusiones. Estos resultados demuestran que ante condiciones de hipoxia y ante la falta de nutrientes, las CM son capaces de sensar rápidamente los cambios ambientales promoviendo un incremento en el flujo autofágico.

Daño oxidativo, senescencia celular y respuesta proinflamatoria en cultivos de células del epitelio pigmentario de la retina

Marazita M^a, Dugour A^b, Marquioni Ramella MD^a, Figueroa JM^b, Suburo A^a
^aLaboratorio de Medicina Celular y Molecular, Facultad de Ciencias Biomédicas, Universidad Austral, Pilar, prov. de Buenos Aires
^bFundación P. Cassará, Buenos Aires. mariemarazita@gmail.com

Objetivos. Estudiar la inducción de senescencia celular por un concentrado de humo de cigarrillo (CHC) y H2O2 en células del epitelio pigmentario de la retina (EPR). Evaluar la expresión diferencial de factores inflamatorios asociados con senescencia. Hipótesis: el desbalance en los niveles de ROS, inducido por CHC o H2O2, promueve daños en el ADN que activan el mecanismo de senescencia celular. La activación del mecanismo de senescencia celular modifica la expresión de factores inflamatorios que podrían contribuir al estado de inflamación crónica propio de la enfermedad.
Métodos. Células ARPE-19 se incubaron con CHC (150 μg/ml por 24 horas, Murty Pharma) o H2O2 (150 μm, 90 minutos y 24 horas de cultivo en medio fresco). Se evaluaron focos de γH2AX y 8-oxo-guanina (8-oxoG) por inmunofluorescencia. Se evaluó el nivel intracelular de ROS utilizando la sonda H2DC- FDA. La inducción de senescencia por CHC o H2O2 se estudió por la detección de la actividad de β-galactosidasa por tinción con el sustrato X-Gal y la expresión de p21 por Western blot. Los niveles de citoquinas se analizaron por qPCR y ELISA.
Resultados. CHC y H2O2 promovieron la formación de focos de γH2AX. El daño por CHC aumentó significativamente los niveles intracelulares de ROS (p< 0.01) y los focos de 8-oxoG (p < 0.01). Tanto CHC como H2O2 activaron el mecanismo de senescencia celular. El antioxidante N-acetilcisteína revirtió este efecto. Los cultivos senescentes aumentaron significativamente la expresión y secreción de IL-6 (p < 0.001) e IL-8 (p < 0.0001).
Conclusiones. La inducción de senescencia celular, por CHC o H2O2 promueve la expresión de factores inflamatorios en células del EPR.

Expresión de PEDF en la retina de rata y su variación con la iluminación continua

Martignone N, Soliño M, López EM, Girardi E, López-Costa JJ

Instituto de Biología Celular y Neurociencia Prof. E. De Robertis, Facultad de Medicina, Universidad de Buenos Aires. noeli.martignone@gmail.com

Objetivos. La iluminación continua (IC) de la retina de rata produce la degeneración de los fotorreceptores generando un modelo que remeda sus enfermedades degenerativas (AMD y retinitis pigmentosa). El objetivo de este trabajo es estudiar la distribución normal de PEDF en la retina de rata y su variación a lo largo del proceso de iluminación.
Métodos. Se emplearon ratas Sprague Dawley controles (CTL) y otras sometidas a IC (12000 lux) durante 1, 2, 5 y 7 días. Los ojos fueron extirpados y fijados por inmersión para ser procesados para inmunocitoquímica (ICQ). Las retinas de otro grupo de animales se procesaron para Western blot (WB). Se utilizó un anticuerpo monoclonal (Chemicon Int) diluido en concentraciones de 1:1000 y 1:500, respectivamente. Las imágenes se cuantificaron utilizando el analizador de imágenes Fiji para la ICQ o el Image Lite Studio en el WB; los datos se analizaron estadísticamente con el programa GraphPad.
Resultados. Los animales controles mostraron inmunorreactividad contra PEDF (PEDF-IR) en la capa de los fotorreceptores. En particular, en la matriz extracelular interfotorreceptores (IPM). Después de 2 días de IC se midió un descenso significativo en la PDEF-IR a nivel de la IPM acompañado por un aumento significativo en las capas más internas de la retina. El WB mostró un descenso general de PEDF en los días 1, 5 y 7.
Conclusiones. Nuestros resultados muestran una disminución inicial de PEDF en la IPM asociado con un aumento en la retina interna a lo largo de la degeneración. Probablemente producto de la difusión de este péptido trófico secundaria a la desorganización de la retina y a la destrucción de la membrana limitante externa. El WB mostró una disminución general de PEDF en la retina iluminada demostrando que su disminución podría jugar un rol en la fisiopatología de las enfermedades degenerativas de la retina.

Caracterización de una población celular altamente indiferenciada de epitelio pigmentario bovino: posibles implicancias en la degeneración macular

Rodríguez Diez G, Giusto NM, Salvador GA.

Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca (INIBI- BB-CONICET), Universidad Nacional del Sur. rodriguezdiez@criba.edu.ar

Objetivos. Nuestro objetivo fue caracterizar un tipo celular obtenido a partir del epitelio pigmentario (EP) de retina bovina, el cual presenta características de pluripotencialidad, y a su vez evaluar la respuesta de dichas células frente al estrés oxidativo inducido por sobrecarga de hierro (Fe).
Métodos. Luego de 15 días de obtenido el cultivo primario de EP logramos aislar una población de células altamente indiferenciadas (EPi). Debido a la implicancia de la acumulación de Fe en pacientes con degeneración macular (DM), después de ser caracterizadas las EPi se expusieron a un ambiente prooxidante en presencia de distintas concentraciones de citrato amónico férrico (FAC) durante 5 días. La evolución del cultivo de EPi fue evaluada mediante la presencia de marcadores de pluripotencialidad por microscopía de fluorescencia (MF). La injuria oxidativa y el estado metabólico del cultivo se determinó por diversas técnicas tales como: reducción del MTT, generación de TBARS y liberación de LDH. La expresión de enzimas antioxidantes y de los niveles de ferritina se determinó por Western Blot y MF.
Resultados. Los cultivos de EPi expresaron marcado- res de células altamente indiferenciadas como SOX2, SOX10 y nestina, además de marcadores de proliferación tales como β-catenina, y proteínas implicadas en el ciclo celular como ciclina D1, PCNA y mcm-2. Por otro lado, estas células expresaron marcadores de cresta neural tales como vimentina y GFAP. Asimismo, la sobrecarga de Fe provocó un marcado incremento en los niveles de peroxidación lipídica, acompañado de un leve incremento de la permeabilidad de la membrana plasmática y una ligera pérdida de la viabilidad mitocondrial. Estos cambios coincidieron con el aumento de la expresión de la ferritina y de proteínas de respuesta al insulto oxidativo, tales como NQO1 y TRx.
Conclusiones. Nuestros primeros hallazgos en el cultivo de EPi demuestran que estas células altamente indiferenciadas responden a la sobrecarga de Fe incrementando los niveles de ferritina y manifestando resistencia al insulto oxidativo. Dichas células que han sido aisladas por otros grupos a partir de ojos humanos, podrían considerarse una plataforma para el estudio de drogas con aplicación en enfermedades degenerativas de la retina.

Efectos del glutamato sobre las células gliales de Müller

Michelis G^a, Dibo M^a,b, Germán OL^a,b, Simon MV^a,b, Volonté YA^a, De los Santos EB^b, Rotstein NP^a,b, Politi LE^a,b

^aInstituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca (INIBI- BB)-CONICET, Universidad Nacional del Sur.
b Universidad Nacional del Sur, Bahía Blanca. gamichelis@gmail.com

Objetivos. Las células gliales de Müller (CGM) son células madre potencialmente capaces de regenerar la retina. Esta capacidad es muy limitada en la retinitis pigmentaria (RP), en la que degeneran los fotorreceptores (FRs). Dado que los FRs liberan glutamato (GLU), hipotetizamos que su disminución en la RP podría afectar la expresión de los marcadores de células madre.
Métodos. Para investigar esta posibilidad comparamos cultivos mixtos de CGM y FRs obtenidos de retina de rata, controles o incubados con GLU a concentraciones fisiológicas (10 μM) o neurotóxicas (100 μM) y determinamos luego su efecto sobre la proliferación, mediante la incorporación de BrdU, las características de células multipotentes, evaluando presencia de nestina y la formación de núcleos anormales mediante la expresión de Lámina.
Resultados. En las CGM la incorporación de BrdU no mostró diferencias significativas en cultivos controles o incubados con GLU; por su parte, en los progenitores neuronales esta incorporación varió de 1% en cultivos controles al 2% en cultivos incubados con 10 μm GLU; en contraste, disminuyó a 0,2% en cultivos incubados con 100 μm GLU. El agregado de10 μm o 100 μm GLU promovió en las CGM la formación de haces elongados o acumulaciones anormales (“ovillos”) de nestina, respectivamente. Además, el tratamiento con 100 μm GLU indujo en las CGM la formación de núcleos anormales con acumulaciones de lámina A.
Conclusiones. Estos resultados sugieren que el GLU participaría en el diálogo entre neuronas y CGM y tendría un rol en la regulación de la capacidad proliferativa en progenitores neuronales y de las características de células madre en las CGM.

El glutamato endógeno regula la actividad proliferativa a través de receptores ampa en la retina adulta de zebrafish

Lambert ML^a, Venera GD^b, Faillace MP^a
^a Instituto de Fisiología y Biofísica Bernardo Houssay (IFIBIO-CONICET). Departamento de Fisiología, Facultad de Medicina, Universidad de Buenos Aires.
^b Instituto Italiano Universitario de Rosario. m.l.lamberti@hotmail.com

Objetivos. La retina de zebrafish crece posnatalmente a partir de una zona ciliar marginal (CMZ). En la CMZ se demostró un máximo de actividad mitótica en la etapa diurna cuando los niveles de glutamato son menores. Se examinó el rol del glutamato y la actividad eléctrica en regular la proliferación celular en la retina de zebrafish.
Métodos. Se utilizaron agonistas y antagonistas de receptores glutamatérgicos. Agonistas: glutamato y L-AP4 (mGluR6 en las CB-ON). Antagonistas: L-aspartato; DNQX y APV, que bloquean a los recepto- res AMPA (AMPAR)/Kainato y NMDAR, respectivamente. La actividad eléctrica se inhibió mediante tetrodotoxina (TTX) por una semana. Las retinas in vivo se trataron con BrdU 4h previas al sacrificio. Se determinó la expresión diferencial, comparando borde con retina madura de las subunidades de los AMPAR por RT-PCR y para cuantificar se realizaron ensayos por RT-qPCR.
Resultados. L-Aspartato y DNQX incrementaron significativamente el número de células proliferativas en la CMZ. TTX inhibió la actividad proliferativa principalmente en el tejido diferenciado. Todas las subunidades del AMPAR se expresan en ambas regiones de la retina (CMZ y madura). Se determinó la expresión transcripcional relativa de algunas subunidades del AMPAR en el tejido maduro.
Conclusiones. Se evidenció un rol relevante del glutamato endógeno a corto plazo (20 h) y de la actividad eléctrica a más largo plazo para regular la actividad mitótica en la CMZ o el tejido maduro. Los efectos del glutamato estarían mediados por AMPAR. Los resultados hasta la fecha revelaron la expresión transcripcional de todas las subunidades del AMPAR en la CMZ. Esto sugiere una acción directa del glutamato sobre la actividad proliferativa en la CMZ de la retina de ZF.

Expresión de proteínas inducidas por frío (CIRP y Rbm3) en la retina de ratas expuestas a hipotermia

Contartese DSa, Rey-Funes M^a, Rolón F^a, Sarotto A^a, Larráyoz IMb, Dorfman V^c, Martínez A^b, Loidl CFa,d

^a Instituto de Biología Celular y Neurociencia Prof. E. De Robertis, Facultad de Medicina, Universidad de Buenos Aires.
^b Centro de Investigación Biomédica de la Rioja (CIBIR), Logroño, España
^c Centro de Estudios Biomédicos, Biotecnológicos, Ambientales y
Diagnóstico (CEBBAD), Universidad Maimónides
^dFacultad de Medicina, Universidad Católica de Cuyo, San Juan. danielacontartese91@gmail.com

Objetivos. Analizar la expresión de las proteínas inducibles por frio CIRP (cold-inducible RNA binding protein) y RBM3 (RNA binding motif protein 3) en la retina de ratas recién nacidas y adultas expuestas a hipotermia, dado que actualmente está siendo muy utilizada como estrategia terapéutica ante diversos tipos de lesiones.
Métodos. Se utilizaron dos tipos diferentes de exposición global y transitoria a hipotermia. Uno consistió en la colocación de ratas recién nacidas durante 15 minutos en heladera a 8ºC y otro, en la exposición de ratas de 30 días durante 3 horas en heladera a 8ºC. La retina de ambos grupos fue comparada con sus respectivos controles neonatos y adultos. Inmediatamente después de la exposición a hipotermia se observó un descenso de la temperatura corporal (medida por vía rectal con un termómetro digital con una delgada termocupla) de 12ºC en neonatos (nacen a 32ºC) y de 2,5ºC en adultos (normotermia: 36,5ºC). A las 12, 24 y 48 horas posteriores a la exposición hipotérmica se analizó la expresión y la localización de CIRP y RBM3 por Western blot, inmunohistoquímica e inmunofluorescencia múltiple. Por Western blot se observó un aumento significativo en la expresión de CIRP y RBM3 en los animales neonatos y de 30 días expuestos a hipotermia. Por inmunohistoquímica se observó en la retina de neonatos expuestos a hipotermia marca para CIRP y RBM3 en neuronas ganglionares y en la retina de ratas de 30 días expuestas a hipotermia marca en células de la capa nuclear interna y en células ganglionares.
Conclusiones. Además de que la hipotermia genera un aplanamiento metabólico que evita el desencadenamiento de mecanismos neurotóxicos, se induciría un proceso activo con cambios en la expresión y localización de proteínas específicas, lo cual intervendría en la génesis de la neuroprotección por hipotermia.

El ADP extracelular a través del receptor P2y1 participa en la activación de la glia de Müller progenitora durante la regeneración de la retina de zebrafish

Medrano M, Faillace P

Instituto de Fisiología y Biofísica Bernardo Houssay (IFIBIO-CONICET), Departamento de Fisiología, Facultad de Medicina, Universidad de Buenos Aires.
medrano.matiasp@gmail.com

Objetivos. Estudiar el rol del sistema purinérgico, incluyendo a los nucleótidos extracelulares y sus receptores P durante la activación de la glia de Müller como progenitor multipotente de la regeneración retinal.
Métodos. La lesión se realizó mediante inyecciones intravítreas de ouabaína 12 μM que daña todas las capas retinales. Luego se administraron agonistas y antagonistas del sistema purinérgico en distintas ventanas temporales del proceso de regeneración. Se marcaron las células en proliferación para su cuantificación por incorporación de BrdU y se analizó muerte celular mediante TUNEL. Se extrajeron retinas enteras para ensayos de WB y RT-qPCR.
Resultados. ADPßS, inyectado en retinas intactas, indujo la activación de la glia de Müller y la proliferación celular. Esta activación fue acompañada por un incremento del receptor P2Y1 (P2Y1R) a nivel transcripcional. A su vez, ADPßS indujo significativamente la expresión del mRNA de lin28a y Stat3, genes indispensables y expresados durante la respuesta regenerativa de las células progenitoras. La lesión cito-tóxica con ouabaína indujo un aumento significativo de la proliferación celular y de la expresión del P2Y1R en diversos tipos celulares retinales. Cuando se realizó la lesión en presencia de un antagonista específico de P2Y1R (MRS2179) se observó una inhibición significativa de la proliferación celular a diferentes tiempos pos-lesión. Paralelamente, el antagonista disminuyó significativamente la expresión del P2Y1R. El MRS2179 provocó además un descenso significativo en la expresión transcripcional de lin28a en el intervalo de activación de la glia de Müller. La apoptosis no fue significativamente diferente en retinas lesionadas y tratadas con MRS2179.
Conclusión. Estos hallazgos describen mecanismos mediante los cuales el daño del tejido retinal provoca la inducción y la retroalimentación positiva de la señalización purinérgica. Además, evidencian uno de los posibles mecanismos a través del cual estas señales estimulan la respuesta regenerativa de las células progenitoras multipotentes.

La degeneración de las neuronas fotorreceptoras disminuye la capacidad regenerativa de las células gliales de Müller en ratones con degeneración retinal

Volonté YAa, German OLa,b, Simon MVa, Dibo M^a, Rotstein NP^a,b, Politi LE^a,b
^a Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca (INI- BIBB)
^b Universidad Nacional del Sur, Bahía Blanca yvolonte@gmail.com

Objetivos. La retinitis pigmentosa se caracteriza por la muerte de las neuronas fotorreceptoras. Las causas de esta enfermedad ya han sido establecidas pero se desconoce el rol de las células gliales de Müller (CGM) en esta patología. Trabajos previos demostraron que las CGM son células multipotentes, potencialmente capaces de regenerar la retina. Sin embargo, no se sabe por qué las CGM son incapaces de regenerar los FRs en la retinitis pigmentosa o en su modelo animal: los ratones rd.
Métodos. Para investigar esta deficiencia, comparamos cultivos mixtos y co-cultivos de CGM y progenitores de fotorreceptores (FRs) obtenidos de retinas de ratones normales (wt) o rd recién nacidos. A dis- tintos tiempos se determinó la capacidad proliferativa por incorporación de BrdU, la presencia de células multipotentes evaluando la expresión de nestina, un marcador de células madre y la presencia de núcleos anormales.
Resultados. El análisis de los núcleos de las CGM rd evidenció la presencia de morfologías anormales respecto de los wt. Las CGM y progenitores de FRs mostraron menor expresión de nestina y menor incorporación de BrdU en los cultivos rd que en los wt. Notablemente, cuando las CGM rd se co-cultivaron con neuronas wt, aumentó la expresión de nestina en las CGM rd. Esto sugiere que la interacción de las CGM con FRs rd alteraría su potencial regenerativo.
Conclusiones. Nuestros resultados preliminares sugieren que la degeneración de los FRs rd alteraría el diálogo normal de los FRs con las CGM, contribu yendo así a la incapacidad regenerativa de las CGM en las retinas rd.

Glucocorticoides en la supervivencia de los fotorreceptores de la retina

Marquioni Ramella MD^a, Marazita MC^a, Galigniana MD^b, Suburo AM^a

^a Facultad de Ciencias Biomédicas, Universidad Austral, Pilar, prov. de Buenos Aires.
^b Instituto de Biología y Medicina Experimental (IByME)-CONICET, Departamento de Química Biológica, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad de Buenos Aires.

mmarquio@cas.austral.edu.ar

Objetivos. La muerte de los fotorreceptores ocurre en diversas enfermedades de la retina que terminan en ceguera. Por lo tanto es necesario identificar los mecanismos que protegen a las células visuales de factores de injuria como el exceso de iluminación. Los glucocorticoides (GC) protegen a los fotorreceptores de los efectos tóxicos de la luz. Para comprender este efecto estudiamos la localización del receptor de glucocorticoides (GR) y de sus formas fosforiladas p-Ser211-GR y p-Ser203-GR en retinas sometidas a distintas condiciones de iluminación.
Métodos. Se emplearon ratones Balb-c, hembras, de 5-7 semanas de edad, criados bajo iluminación cíclica (12 h 60 lux: 12 h oscuridad). Se tomaron muestras a mediodía y después de exposición a oscuridad prolongada (OP, 7 días). Se hicieron Western blots de retinas totales o de segmentos externos (SE) aislados en horario diurno. También se efectuaron estudios inmunoenzimáticos o inmunofluorescentes, utilizándose anticuerpos contra GR, p-Ser211-GR, p-Ser203-GR, FKBP52, una inmunofilina asociada a GR, y tubulina.
Resultados. En los Western blots de retinas enteras se observó inmunorreactividad (IR) para GR, p-Ser203-GR y p-Ser211-GR, pero en los SE sólo se visualizaron GR y p-Ser203-GR. En los cortes de retina se observó GR-IR en todos los núcleos celulares
y en los terminales sinápticos de la capa plexiforme externa (CPE). La p-Ser211-GR-IR era exclusivamente nuclear. No se detectaron cambios significativos asociados a la iluminación. p-Ser203-GR-IR apareció en los SE y en la CPE junto con FKBP52-IR. Ambos
marcadores se modificaron según las condiciones de iluminación, aumentando después de OP.
Conclusiones. La presencia de GR- y p-Ser203- GRIR apoya la hipótesis de una acción directa de los GC sobre los SE y el pedículo sináptico de los fotorreceptores. Los cambios inducidos por la oscuridad sugieren que p-Ser203-GR podría modular la supervivencia
de los fotorreceptores en ambientes fototóxicos, tal vez en forma no-genómica.

Desarrollo de nanocapsulas lipídicas de acetónido de triamcinolona como plataformas para liberación ocular

Formica ML^a, Ullio Gamboa GV^a, Benoit JP^b, Allemandi DA^a, Luna Pinto J^c, Palma SD^a

^a Unidad de Investigación y Desarrollo en Tecnología Farmacéutica (UNITEFA-CONICET). Departamento de Farmacia, Facultad de Ciencias Químicas, Universidad Nacional de Córdoba.
^bINSERM U1066, MINT-Micro et Nanomédecines Biomimétiques, Angers, Francia.
c Centro Privado de Ojos Romagosa y Fundación Ver, Córdoba. marialinaformica@gmail.com

Objetivos. El acetónido de triamcinolona (TAA) se considera un fármaco de primera línea por sí mismo y como coadyuvante en el tratamiento de diferentes enfermedades intraoculares como el edema macular, la trombosis venosa retinal, la uveítis y la degeneración macular asociada con la edad. Las nanocápsulas lipídicas (LNCs) son sistemas biocompatibles que permiten vehiculizar fármacos hidrofóbicos e hidrofílicos y presentan versatilidad en su composición y aplicación por distintas vías de administración. El objetivo de este trabajo consistió en desarrollar y caracterizar una nueva formulación de nanocápsula lipídica como sistema de vehiculización de TAA.
Métodos. Las LNCs se prepararon por un método de inversión de fases optimizado. Se estudió la in- fluencia de dos cosurfactantes (captex® 500p-glyceryl triacetate y ácido oleico) en tres proporciones: 20%,30% y 50% en relación con la fase oleosa de la formulación original y el cargado con TAA. Se determinó el tamaño medio de partícula (TMP), el índice de polidispersidad (PI) y el potencial zeta (PZ) de las LNCs obtenidas.
Resultados. Las LNCs con 20% de ambos cosurfactantes presentaron resultados aceptables. Las LNCs con captex® 500p alcanzaron TMP de 42,3 ± 0,2 nm, PI menor a 0,2 y PZ -5 ± 1 mV, mientras que las LNC con ácido oleico mostraron TMP de 37,0 ± 0,6 nm, PI menor a 0,1 y PZ -11 ± 4 mV.
Conclusiones. Debido a sus propiedades fisicoquímicas desfavorables se hace imperativo buscar alternativas de vehiculización de TAA. De esta manera, las LNCs son sistemas promisorios que pueden considerarse como una estrategia potencial para mejorar la eficacia y disminuir los efectos secundarios de este fármaco tan utilizado en el tratamiento de las patologías antes mencionadas, ya que permiten su encapsulado manteniendo constantes sus propiedades en períodos prolongados de tiempo.

Prevalencia de los vicios de refracción en una población rural de argentina

Correa LJ^a, Espósito E^a, Crim N^b, Suárez MF^b, González Castellanos ME^a, Martínez D^a, Urrets-Zavalía JA^a, Serra HM^b.

^a Departamento de Oftalmología, Clínica Universitaria Reina Fabiola, Universidad Católica de Córdoba.
^b Facultad de Ciencias Químicas, Universidad Nacional de Córdoba.

leandrocorrea50@hotmail.com
Los dos últimos autores contribuyeron en igual medida en esta investigación.

Objetivos. Evaluar la prevalencia de los vicios de refracción entre adultos jóvenes y personas mayores en una población rural de Argentina. Dentro de los vicios de refracción encontramos miopía, hipermetropía, astigmatismo y anisometropía.
Métodos. Estudio observacional, descriptivo y retrospectivo en el que se analizó la frecuencia de miopía, hipermetropía, astigmatismo, emetropía y anisometropía en 144 pacientes del poblado rural de Aguada Guzmán. Se consideraron como significativas todas la variables con una p< 0.05.
Resultados. La frecuencia real en la población para los diferentes vicios de refracción fue: para la emetropía la prevalencia real en la población fue de 34.03%; para la miopía la prevalencia real en la población fue del 18.06%; para la hipermetropía, de 46.53%; para el astigmatismo, es de 63.19%; y para la anisometropía, 14.58%.
Conclusiones. En este estudio los vicios de refracción más frecuentes resultaron ser el astigmatismo y la hipermetropía. Es miope una pequeña porción de los pacientes. Para la hipermetropía esto es coincidente con los resultados encontrados en estudios que se llevaron a cabo en poblaciones rurales de otras partes del mundo. Por otro lado, frecuencias más altas de miopía también se observaron en centros urbanos donde se encontró una estrecha relación entre un alto nivel educativo y esta enfermedad. Esto concuerda con los hallazgos en Aguada Guzmán, donde el nivel educativo de los pobladores es bajo ya que sólo cuentan con educación formal básica (nivel primario) con un importante nivel de deserción escolar.

Variaciones en la pérdida de poder del cristalino de los pollos, asociadas a crecer con baja iluminación ambiente

Iribarren R^a, Cohen Y^b, Stone R^c

^a Centro Médico San Luis, Buenos Aires.
^bGoldschleger Eye Research Institute, Tel Aviv University, Tel Hashomer, Israel
^c Scheie Eye Institute, Department of Ophthalmology, School of Medicine, University of Pennsylvania, Philadelphia, Estados Unidos rafairibarren@gmail.com

Objetivos. Presentar un modelo de miopía experimental simple que permite estudiar los componentes de la refracción durante el proceso de emetropización en los pollos. Mostrar las variaciones de poder del cristalino en los diferentes grupos refractivos.
Métodos. Se hicieron crecer pollos entre 10 y 90 días de edad bajo regímenes de 12 x 24 horas de iluminación de 100.000 lux, 500 lux y 50 lux. Se realizaron queratometrías, biometrías y refracciones bajo anestesia general cada 30 días. Con estos datos se calculó el poder del cristalino para los diferentes grupos de iluminación.
Resultados. Los pollos que crecieron con baja iluminación desarrollaron miopía. Esta miopía se debió a una combinación de aumento del largo axial con una disminución en la pérdida del poder del crista- lino. Llegando al día 60 el grupo de 50 lux, aún no miope, había perdido más poder del cristalino que el grupo de 500 lux (9.02 vs. 5.96 de cambio dióptrico respectivamente, p < 0.001). Luego, entre los días 60-90 el grupo con baja iluminación no tuvo un cambio significativo en el poder del cristalino (disminuyó solo 2.89 dioptrías, p = 0.727), mientras que los otros grupos tuvieron una baja significativa que compensó el crecimiento del largo axial (9.43 y 10.20 dioptrías, respectivamente, p < 0.001 en ambos casos).
Conclusiones. Los pollos que crecen en un medio de baja iluminación desarrollan miopía. Esa miopía en los pollos depende de un incremento en el ritmo de crecimiento del largo axial y de una alteración en ritmo de cambio del poder del cristalino.

Validación de un sistema de sensibilidad al contraste para la transferencia a la clínica oftalmológica

Alcalde NG^a, Paz C^a, Sfer AM^b, Colombo EM^a
^a Instituto de Investigación en Luz, Ambiente y Visión (ILAV), Departamento de Luminotecnia, Luz y Visión (DLLyV), Facultad de Ciencias Exactas y Tecnología (FACET), Universidad Nacional de Tucumán.
^b Facultad de Ciencias Exactas y Tecnología (FACET), Universidad
Nacional de Tucumán.

noeg.alcalde69@gmail.com

Objetivos. Validar un sistema informatizado para la determinación de la sensibilidad al contraste (SC) para su transferencia a la clínica oftalmológica mediante el diseño de pruebas de repetitividad y su dependencia con la edad y el entrenamiento de las personas. También se analizó el efecto de la iluminancia del ambiente sobre la repetitividad de los valores medidos.
Métodos. Las pruebas se basaron en discriminación de redes sinusoidales de frecuencias espaciales de 1, 4 y 12 c/º (baja, media y alta) y las mediciones se repitieron cinco veces, con 13 sujetos (24 ojos) normales de dos rangos de edad (20-49 y 50-70 años), de los cuales la mitad tenía un entrenamiento previo, obteniéndose así cuatro grupos distintos. La prueba se diseñó de manera que cada participante midiese la SC solamente para una frecuencia (proceso aleatorio). Las mediciones se realizaron bajo adaptación fotópica en una habitación sin iluminación ambiental. Para evaluar la influencia de iluminación se midió bajo las mismas condiciones anteriores y con luz ambiente.
Resultados. Los resultados obtenidos muestran alto grado de repetitividad para la frecuencia de 1 y 12 c/°, la variabilidad obtenida para 4c/º se explicaría por corresponder al máximo de sensibilidad, es decir a valores muy pequeños de contraste. Con respecto de los factores que influyen sobre la repetitividad de la medida, ni la edad ni el entrenamiento influyen significativamente, pero sí hay incidencia de la iluminación sobre todo para las frecuencias medias.
Conclusiones. Los resultados de este trabajo muestran que el sistema es útil como medida de consultorio, obteniéndose resultados precisos en tiempo reducido, ya que con una sola medición es suficiente, excepto para las frecuencias intermedias, donde se recomienda repetir la medición y calcular un promedio. En cuanto a la iluminación del ambiente los resultados ponen en evidencia que en condiciones de adaptación fotópicas es importante mantener la misma condición de medición.

Correlación entre difusión y contraste umbral usando filtros difusores
Paz Filgueira C, Colombo E
Departamento de Luminotecnia, Luz y Visión (DLLyV), Instituto de Investigación en Luz, Ambiente y Visión (ILAV)-CONICET), San Miguel de Tucumán.

cpazfilgueira@herrera.unt.edu.ar

Objetivos. Evaluar la correlación entre difusión intraocular y contraste umbral para distintas frecuencias espaciales utilizando diferentes filtros difusores.
Métodos. En total se utilizaron 12 condiciones de filtros difusores ubicados delante del ojo de un observador con AV entre 0,9 y 1 para todas las condiciones. Se realizaron medidas de difusión con el dispositivo C-Quant y medidas de sensibilidad al contraste (SC) con el sistema informático FVC-100. C-Quant utiliza un método psicofísico de compensación por comparación para cuantificar la difusión. Las medidas de SC se realizaron en 5 frecuencias espaciales para todas las condiciones difusoras. Los datos utilizados provistos por los equipos fueron el coeficiente de scattering S y el contraste umbral (CU). Se evaluó la correlación entre los datos de difusión y los de SC separándolos en las distintas frecuencias espaciales.
Resultados. Se encontró que los parámetros S y CU se ajustan a una curva exponencial. Los valores de R2 fueron de 0.94, 0.96, 0.89, 0.93 y 0.90 para las frecuencias de 1, 2, 4, 8, y 12 c/º respectivamente.
Conclusiones. La correlación entre los datos de S y CU fueron muy buenas para todas las frecuencias espaciales, lo que evidencia la capacidad del sistema FVC100 para detectar variaciones en el contraste umbral provocadas por difusores.

Estudio de lámparas de hendidura en la provincia de Entre Ríos, Argentina

Torres RM^a,b, González GRb, Faisano A^b
^a Centro de Ojos Dr. Lódolo, Paraná, Entre Ríos.
^b Bioingeniería Ocular, Facultad de Ingeniería, Universidad Nacional de Entre Ríos.
romator7@gmail.com

Objetivos. Realizar un relevamiento y una evaluación de lámparas de hendiduras (LH) de la provincia de Entre Ríos, teniendo en cuenta que es la herramienta principal que utiliza un oftalmólogo para examinar el globo ocular.
Métodos. Se realizó un estudio descriptivo con un cuestionario enviado por e-mail a los oftalmólogos de la Asociación Entrerriana de Oftalmología (AEO) para conocer las características de las LH (marca, modelo y año), si registraban imágenes y para conocer problemas o sugerencias. La invitación a participar fue enviada a los 48 oftalmólogos de la AEO una vez por semana, durante tres semanas.
Resultados. Respondieron 20 oftalmólogos (41,6% del total). De estos, el 90% tiene LH, dentro de los cuales el 39% tiene sólo una; el 33% tiene dos, el 22% tiene tres y el 6% posee más de tres. El 50% refirió conocer sus características. La marca predominante fue Topcon, siguiéndole en igual proporción Kowa, Bobes, CSO y Shin Nippon. Un 35% realiza registro fotográfico. Los años de adquisición variaron entre 1990 y 2000, más de la mitad entre el 2000 y 2012; el resto entre 1994-1999. El 74% refirió no haber tenido problemas y el 26% sí (poca luminosidad, contacto de la llave de luz y falta de cámara de fotos incorporada). El 70% no piensa cambiar su LH en los próximos 2 años.
Conclusiones. Casi la mitad de los oftalmólogos de la AEO participaron del estudio. Permitió conocer que la mayoría de las LH han sido adquiridas luego del año 2000, que un 35% registra imágenes y que se han referido pocos problemas técnicos con estos aparatos como también deseos de mejora de los usuarios. Los datos obtenidos con la interacción de oftalmólogos y bioingenieros resultará fundamental para obtener mejoras técnicas a futuro.

Estudio de la velocidad de pérdida de la agudeza visual de pacientes con degeneración macular

Real JP^a, Juarez CP^b, De Santis MO^c, Palma SD^a, Luna JD^b

^a Departamento de Farmacia, Facultad de Ciencias Químicas, Universidad Nacional de Córdoba, UNITEFA (CONICET).
^b Centro Privado de Ojos Romagosa-Fundación Ver, Córdoba.
^c Instituto de Economía y Finanzas, Facultad de Ciencias Económicas, Universidad Nacional de Córdoba.
jpreal@fcq.unc.edu.ar

Objetivos. Estudiar el comportamiento del cambio de agudeza visual (AV) en función del tiempo en pacientes con degeneración macular asociada con la edad (DMAE) con lesión activa.
Métodos. A través de un análisis retrospectivo de 84 historias clínicas de pacientes con DMAE se estudió el cambio de AV experimentado por estos enfermos en el tiempo transcurrido desde la indicación de la dosis y su correspondiente aplicación, tanto en la fase inicial como tras una reactivación de la lesión neovascular. A fin de estudiar el comportamiento del cambio de la AV así como las variables que influyen significativamente sobre él, se realizó un modelo de regresión lineal en ambos períodos.
Resultados. Como resultado de un retraso promedio de 87,5 y 224 días en el acceso a las dosis en las etapas de inicio y reactivación respectivamente, los pacientes sufrieron pérdidas promedio de 10,67 y 22,7 letras. En ambos períodos pudo observarse que la relación cambio de AV-tiempo de demora fue descripta con mayor precisión mediante un modelo polinómico (r2 = 0,56 y 0,89, respectivamente), con una desaceleración de la tasa de cambio de la AV y una velocidad que indicaría un cambio promedio de 5 letras en tan sólo 21 días. Cabe destacar que en el período de reactivación, ese cambio es independiente de la AV del paciente al inicio de la reactivación.
Conclusiones. La AV de pacientes con DMAE con lesión activa se modifica en función del tiempo con un comportamiento asintótico y desacelerado, con una rápida pérdida de AV en tiempos tempranos que es independiente de la AV que se posea previa a la reactivación. El tratamiento o retratamiento de la DMAE debe iniciarse con urgencia y son factores clave la disponibilidad y la accesibilidad a las dosis.

Medición in vivo de la transmitancia del ojo humano

Sánchez RF^a, Corregidor DH^a, Issolio LA^a,b

^a Instituto de Investigación en Luz, Ambiente y Visión (ILAV)-CO- NICET, Universidad Nacional de Tucumán.
^b Departamento de Luminotecnia, Luz y Visión (DLLyV), Facultad de Ciencias Exactas y Tecnología (FACET), Universidad Nacional de Tucumán.

roberto_francisco_sanchez@hotmail.com

Objetivos. Estimar la transmitancia de un ojo in vivo a partir del uso de la técnica de doble paso.
Métodos. Se utilizó un sistema de doble paso que recoge con una cámara CCD la imagen formada en la retina por un haz láser de 780 nm después de atravesar los medios ópticos del ojo. Se tomaron imágenes en
10 ojos de sujetos entre 25 y 45 años con potencias del láser que se variaron con tensiones entre 800 y 4000 mV, promediándose en cada imagen de doble paso las intensidades en la zona periférica (30 a 45 minutos de arco). Luego se trazaron rectas a partir de los datos de intensidad periférica en función de la potencia de láser y se determinó su pendiente (Sint/pot). Este mismo procedimiento se aplicó a un ojo artificial con una retina de papel (cartulina negra), con reflectancia del 10% y con 7 valores de transmitancia (usando filtros de transmitancia conocida) cubriendo un rango de 11% a 88% que sirvió de recta de calibración.
Resultados. A partir de los valores de Sint/pot de los sujetos medidos y de la recta de calibración se obtuvieron los valores de transmitancia del ojo de los sujetos en el rango de 54% a 85%, coincidentes a los valores hallados en la literatura para la longitud de onda usada.
Conclusiones. El sistema permite estimar la transmitancia in vivo de un ojo a partir de una secuencia de10 valores de intensidad en la periferia de la imagen de doble paso.

Neuritis óptica experimental inducida por la microinyección de lipopolisacárido bacteriano en el nervio óptico

Aranda ML, Dorfman D, Sande PH, Keller Sarmiento MI, Rosenstein RE

Laboratorio de Neuroquímica Retiniana y Oftalmología Experimental, Departamento de Bioquímica Humana, Facultad de Medicina, Universidad de Buenos Aires.
Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos (CEFyBO)-CONICET, Universidad de Buenos Aires.
marcos8877@hotmail.com

Objetivos. La neuritis óptica (NO) es una condición que involucra inflamación primaria, desmielinización y daño axonal en el nervio óptico, que provoca la pérdida de células ganglionares retinales (CGR) y disfunción visual. El objetivo de este trabajo fue examinar la capacidad de una única inyección del lipopolisacárido bacteriano (LPS) directamente en el nervio óptico para inducir alteraciones funcionales y estructurales compatibles con la NO.
Métodos. Para ello, nervios ópticos de ratas Wistar macho adultas permanecieron intactos o se inyecta- ron con vehículo o LPS. Se evaluó el efecto del LPS a varios intervalos postinyección en términos de: 1) función de la vía visual y retinal (potenciales visuales evocados [VEP] y electrorretinogramas [ERG], respectivamente), 2) transporte anterógrado desde la retina a sus áreas de proyección, 3) reflejo pupilar consensual (RPC), 4) histología del nervio óptico, 5) reactividad de la microglía/macrófagos, 6) reactividad astrocitaria, 7) número de axones, 8) desmielinización y 9) número de CGR.
Resultados. El LPS indujo una disminución significativa y persistente en la amplitud de los VEP y el RPC, sin cambios en el ERG. Además, el LPS indujo un déficit en el transporte anterógrado desde la retina a sus blancos sinápticos y una respuesta inflamatoria temprana con aumento de la celularidad e inmunorreactividad para Iba-1 y ED1 en el nervio óptico, se- guido por cambios más tardíos en la densidad axonal, astrocitosis, desmielinización y pérdida de CGR y de axones del nervio óptico.
Conclusiones. Estos resultados sugieren que la microinyección de LPS en el nervio óptico podría constituir un nuevo modelo experimental de NO primaria.

Efectos funcionales y estructurales de la isquemia retinal aguda sobre el sistema visual no formador de imágenes

González Fleitas MF, Bordone MP, Rosenstein RE, Dorfman D

Laboratorio de Neuroquímica Retiniana y Oftalmología Experimental, Departamento de Bioquímica Humana, Facultad de Medi- cina, Universidad de Buenos Aires.
Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos (CEFyBO)-CONICET, Universidad de Buenos Aires.
florgf_88@hotmail.com

Objetivos. La isquemia retinal es una causa frecuente de discapacidad visual. Las células ganglionares retinales (CGR) son particularmente vulnerables al daño isquémico retinal. Un subtipo particular de CGR que expresan el fotopigmento melanopsina (mRGC) regula funciones visuales no formadoras de imagen, tales como el reflejo pupilar (PLR) y los ritmos circadianos. El objetivo de este trabajo fue analizar el efecto de la isquemia retinal sobre las mRGC y la función del sistema visual no formador de imagen.
Métodos. Se indujo isquemia retinal aguda por aumento de la presión intraocular a 120 mmHg durante 40 minutos en ratas Wistar macho adultas. En los ojos control se realizó un procedimiento simulado. A las
4 semanas de la isquemia, los animales se sometieron a electrorretinografía, análisis histológico, estudios inmunohistoquímicos, trazado anterógrado y registro de actividad locomotora.
Resultados. La isquemia indujo una disfunción retinal significativa y marcadas alteraciones histológicas. En este intervalo, la isquemia provocó una disminución significativa en el número de CGRs Brn3a(+) y en el transporte anterógrado desde la retina al colículo superior y al núcleo geniculado lateral, en tanto que el número de mRGC, los niveles de melanopsina y las proyecciones retinales a los núcleos supraquiasmático y pretectal olivar no fueron afectados por la isquemia. A baja intensidad de luz se observó una disminución en el PLR consensual a ojos isquémicos, en tanto que a alta intensidad de luz, la isquemia retinal no afectó el PLR consensual. Los animales con isquemia en ambos ojos mostraron un ritmo conservado de actividad locomotora y una velocidad de resincronización frente a un cambio de fase que no difirió de los observados en animales sometidos a un procedimiento simulado en ambos ojos.
Conclusiones. Estos resultados demuestran la preservación del sistema visual no formador de imagen frente al daño isquémico retinal agudo.

Retinopatia diabética: caracterización de un nuevo modelo animal murino

Paz MC^a, Lorenc VE^a, Subirada P^a, Castro C^b, Sánchez MC^a
^a Departamento de Bioquímica Clínica, Facultad de Ciencias Químicas, Universidad Nacional de Córdoba. CIBICI-CONICET, Córdoba.
^b Laboratorio de Biología Vascular, Facultad de Ciencias Médicas, Universidad Nacional de Cuyo. IMBECU-CONICET, Mendoza. mcpaz@fcq.unc.edu.ar

Objetivos. La diabetes mellitus tipo 2 asociada con obesidad, dislipemia y otros factores de riesgo cardiovascular constituyen el síndrome metabólico (SM). Una de las complicaciones vasculares más graves es la retinopatía diabética (RD). Muchas especies animales se estudiaron como posibles modelos de RD; sin embargo, la progresión hacia lesiones retinales más avanzadas fue menos frecuente. En este trabajo se propone caracterizar un modelo animal de RD que conjugue las alteraciones metabólicas involucradas en el SM y que reproduzca lo más cercanamente posible la RD humana.
Métodos. Se trabajó con tres grupos de animales: ratones C57BL/6 (WT) dieta normal (DN), ratones C57BL/6 deficiente en apolipoproteína E (ApoE-KO) (DN) y ratones ApoE-KO con dieta fructosa (DF) a partir de los 2 meses (M) de edad. Mediante técnicas estructurales y bioquímicas se estudiaron las retinas de los tres grupos de animales a los 6 M y 8 M.
Resultados. Previamente se demostró que animales ApoE-KO (2 M de DF) mostraron diferencias significativas en pruebas metabólicas, así como una marca- da susceptibilidad a desarrollar alteraciones vasculares tempranas. El análisis histológico (hematoxilina-eosina) reveló proliferación celular en áreas de la membrana limitante interna sólo en animales ApoE-KO (8 M). Por ensayos de inmunofluorescencia se pudo observar expresión de la proteína acida fibrilar de la glía (GFAP) en astrocitos de animales WT, mientras que animales ApoE-KO (6 M) con DF mostraron además expresión a nivel de las células gliales de Müller, lo cual se hizo mucho más evidente a los 8 M. No se observaron diferencias en la expresión de GFAP entre animales ApoE-KO (8 M) con DF respecto a DN.
Conclusiones. Los resultados muestran que animales ApoE-KO con tiempos cortos de DF comienzan a manifestar alteraciones retinales respecto de animales DN. Sin embargo, en animales de 8 M, las alteraciones retinales responden independientemente de la dieta. Esto indica que la deficiencia de ApoE es suficiente para inducir alteraciones de retina evidentes y que la DF aceleraría este proceso. Posteriores estudios permitirán caracterizar las vías moleculares involucradas en el desarrollo de la RD en este modelo animal de SM.

Efectos del ambiente enriquecido en un modelo de diabetes experimental en ratas adultas

Dorfman D, Aranda ML, Gonzalez Fleitas MF, ChanelliMS, Rosenstein RE

Laboratorio de Neuroquímica Retiniana y Oftalmología Experimental, Departamento de Bioquímica Humana, Facultad de Medicina, Universidad de Buenos Aires, CEFyBO-CONICET. damiandorfman@gmail.com

Objetivos. La retinopatía diabética (RD) es una causa frecuente de ceguera irreversible. La isquemia es un componente clave en el daño retinal por diabetes experimental. El ambiente enriquecido (AE) consiste en una combinación compleja de estímulos inanimados y sociales. Recientemente demostramos el efecto protector del AE frente al daño retinal inducido por isquemia aguda en ratas adultas. El objetivo de este trabajo fue analizar el efecto del AE sobre el daño retinal inducido por RD experimental en ratas adultas.
Métodos. Se indujo diabetes experimental mediante la inyección de estreptozotocina (60mg/kg) en ratas Wistar macho adultas. Una vez constatada la diabetes, se expuso a los animales a ambiente estándar (AS) o AE durante 10 semanas. Semanalmente se evaluó la función retinal (electrorretinograma). Se obtuvieron las retinas y se analizaron la histología a las 10 semanas de diabetes y la macroglía (inmunohistoquimica), la barrera hematorretinal (BHE), los niveles y expresión de VEGF, el daño oxidativo (TBARs), los niveles de TNFa y la expresión de BDNF a las 6 semanas de diabetes.
Resultados. En animales en AS, la diabetes indujo una disfunción de retina progresiva sin alteraciones histológicas. A las 6 semanas, en animales en AS la diabetes provocó alteraciones macrogliales, aumento de permeabilidad de la BHE, aumento en los niveles y expresión de VEGF, aumento en los niveles de TBARs y TNFa y disminución en la expresión de BDNF. To- das estas alteraciones se previnieron por la exposición a AE. Cuando se expuso a AE a animales diabéticos de 7 semanas en AS se observó una recuperación de la función retinal significativa a la semana de la exposición a AE.
Conclusiones. Estos resultados demuestran que el AE protege a la retina del daño inducido por diabetes experimental y revierte la disfunción retinal por RD en ratas adultas.

Efecto de la administración de alfa-1 antitripsina en un modelo murino de retinopatía diabética

Ortiz G, Salica JP, Gallo JE

Facultad de Ciencias Biomédicas, Universidad Austral, Pilar, prov. de Buenos Aires.

Objetivos. En este trabajo se busca evaluar el efecto sobre la RD de la alfa-1-antitripsina (AAT), un antiinflamatorio endógeno. Métodos. Al segundo día de vida posnatal, ratas Wistar recibieron una inyección intraperitoneal de estreptozotocina (STZ). Aquellos animales que luego de 2 días de la aplicación de STZ presentaron glucemias mayores a 200 mg/dl fueron clasificados como diabéticos. En el grupo experimental se aplicó una inyección intravítrea de AAT (prolastin C; volumen final: 2 μl). En los mismos animales se aplicó buffer intravítreo en el ojo contralateral. Mediante Western-blot e inmunofluorescencia se analizó la expresión de NFKb, MMP-9 y MMP-12 en muestras de retina. Los animales no diabéticos que recibieron tratamiento se utilizaron como control. Los animales fueron sacrificados a la semana 26.
Resultados. No se observaron diferencias significativas en la expresión de NFKb p50 y p100 entre las variadas condiciones experimentales. Las retinas de ojos diabéticos tratados con AAT presentaron una actividad gelatinasa menor de MMP-9 y una expresión mayor de MMP-12 respecto de las retinas de ojos diabéticos tratados con buffer. Asimismo, las retinas de animales no diabéticos presentaron niveles significativamente más bajos de MMP-12 y MMP-9 que los encontrados en animales diabéticos tratados con AAT.
Conclusiones. Los resultados de nuestro estudio sugieren que la expresión de la MMP-9 y MMP-12 estarían reguladas por AAT, siendo esto de importancia para la remodelación de la matriz extracelular, hecho presente en el desarrollo de la retinopatía diabética. Conocer los mecanismos que regulan este proceso nos permitirá identificar nuevos blancos terapéuticos y desarrollar drogas que reduzcan el proceso inflamatorio causa del edema macular asociado a la retinopatía diabética.

Mecanismos involucrados en el efecto antiinflamatorio de la melatoninaen la uveítis experimental

Sande PH, Dorfman D, Fernandez D, Chianelli M, SáenzD, Rosenstein RE

Laboratorio de Neuroquímica Retiniana y Oftalmología Experimental, Departamento de Bioquímica Humana, Facultad de Medicina, Universidad de Buenos Aires. CEFyBO-CONICET.

p_sande@yahoo.com

Objetivos. La uveítis es una enfermedad inflamatoria ocular prevalente. En trabajos previos hemos demostrado que la melatonina no sólo previene sino también contrarresta la uveítis inducida por lipopolisacárido (LPS) en el hámster dorado. El objetivo de este trabajo fue analizar los mecanismos involucrados en el efecto antiinflamatorio de la melatonina administrada a posteriori del inicio de la inflamación ocular.
Métodos. Se inyectó vehículo o LPS en el vítreo de ojos de hamsters dorados macho adultos. La melatonina se administró por vía intraperitoneal cada 24 horas, comenzando a las 12 o 24 horas postinyección de LPS. Se analizaron los niveles de prostaglandina (PG) E2 y PGF2α (por radioinmunoensayo) en el humor acuoso. Asimismo, se examinó la actividad retinal de óxido nítrico sintasa (NOS) (utilizando 3H-arginina), la peroxidación lipídica (niveles de sustancias reactivas al ácido tiobarbitúrico [TBARs]) y los niveles de TNFα (por ELISA). La estructura de la retina se analizó por microscopía óptica e inmunohistoquímica (niveles de proteína glial fibrilar ácida [GFAP] en células de Müller).
Resultados. Concomitantemente con una mejoría en los signos clínicos y en la función de la retina (electrorretinografía), ambos tratamientos con melatonina redujeron significativamente los niveles de PG en el humor acuoso de ojos inyectados con LPS. Asimismo, ambos tratamientos con melatonina protegieron la estructura de la retina, redujeron los niveles de GFAP en células Müller y el aumento en la actividad retinal de NOS, la peroxidación lipídica y los niveles de TNFα inducido por LPS.
Conclusiones. Estos resultados sugieren la participación de las PG a nivel del humor acuoso, la actividad NOS, los niveles de TNFα y el estrés oxidativo retinales en la atenuación de la inflamación ocular experimental inducida por melatonina y avalan el uso de melatonina como recurso terapéutico para el tratamiento de la uveítis.

Rol de los receptores X para retinoideos (RXR) en un modelo de retinitis pigmentosa

German OL, Volonté YA, Garelli A, Rotstein NP, Politi LE
Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca (INIBIB- B)-CONICET, Universidad Nacional del Sur. olgerman@criba.edu.ar

Objetivos. En enfermedades neurodegenerativas de la retina los fotorreceptores (FR) degeneran progresivamente por apoptosis causando ceguera en forma irreversible. Hemos demostrado que la activación de los receptores nucleares para retinoides X (RXR) promueve la supervivencia de los FR de retina de rata en modelos de neurodegeneración in vitro. Estudiamos si la activación de los RXR promovería la supervivencia de los FR en un modelo murino de retinitis pigmentosa: el ratón rd.
Métodos. Preparamos cultivos mixtos neurogliales de retina de ratones rd y controles (wt). A distintos días analizamos la expresión y la localización de los RXR mediante microscopía confocal y evaluamos la apoptosis neuronal mediante el ensayo de TUNEL y DAPI. Investigamos el efecto protector de la activación de los RXR sobre los FR rd tratando a los cultivos con el agonista PA024 reiteradas veces antes de producirse el pico de muerte de los FR y evaluamos apoptosis.
Resultados. Se evidenció un cambio en la localización intracelular de los RXR en las células gliales con el tiempo, pasando de una localización nuclear a nuclear y perinuclear que ocurrió antes en los cultivos rd que en los wt. En los cultivos rd el porcentaje de neuronas apoptóticas fue mucho mayor que en los wt, incrementándose en ambos con el tiempo en cultivo. El tratamiento con el agonista retrasó la apoptosis de los FR en los cultivos rd, disminuyendo el porcentaje de células con núcleos picnóticos respecto del de células con fragmentación nuclear.
Conclusiones. Estos resultados preliminares sugieren que el cambio en la localización de los RXR en las células gliales rd está acelerado respecto del wt y que la activación de los RXR postergaría el inicio de la muer- te por apoptosis de los FR en el modelo rd in vitro.

Expresión de proteínas inducibles por frío en un modelo de retinopatía proliferativa isquémica

Rey-Funes M^a, Contartese DS^a, Rolón Fa, Goldstein J^b, Larráyoz IM^c, Dorfman VB^d, Martínez A^c, Loidl CF^a,e
^aInstituto de Biología Celular y Neurociencia Prof. E. De Robertis, Facultad de Medicina, Universidad de Buenos Aires.
^b Departamento de Fisiología, Facultad de Medicina, Universidad de Buenos Aires.
^c Centro de Investigaciones de la Rioja (CIBIR), España
^d Centro de Estudios Biomédicos, Biotecnológicos, Ambientales y
Diagnóstico (CEBBAD), Universidad Maimónides, Buenos Aires. e Facultad de Medicina, Universidad Católica de Cuyo, San Juan.

manuel.reyfunes@gmail.com

La asfixia perinatal (PA) puede lesionar la retina y generar retinopatía proliferativa isquémica. En un modelo de AP demostramos neurodegeneración y gliosis compatibles con la retinopatía del prematuro, en la que el sistema nitrérgico interviene en su fisiopatología y la adrenomedulina en la generación de neovascularización aberrante. En dichos estudios la hipotermia tuvo efecto protector. Recientemente se ha descripto la presencia de proteínas inducibles por frío (CIRP: cold-inducible RNA binding protein y RBM3: RNA binding motif protein 3) como respuesta de la exposición a hipotermia en diversos tejidos. No se ha reportado aún su expresión en la retina. El objetivo del trabajo fue evaluar la expresión de CIRP y RBM3 en animales sometidos a PA y PA con dos diferentes aplicaciones de hipotermia. Utilizamos retinas de ratas de 6, 12 y 24 horas posteriores a la PA por 20 minutos en condiciones de normotermia (PA-37ºC), de PA por 20 minutos en hipotermia (HYP-15ºC) y de PA por 20 minutos en normotermia, que luego se colocaron en hipotermia a 8ºC durante 15 minutos (HYP-PA). Los controles (CTL) fueron animales nacidos a término. La expresión de CIRP y RBM3 se evaluó por Western blot, inmunofluorescencia múltiple y rt-PCR. Con Western blot y rt-PCR se observó un aumento significativo en la expresión de CIRP y RBM3 a partir de las 12 horas posteriores a la PA en los dos grupos expuestos a hipotermia. Estas proteínas se observaron en neuronas ganglionares y en somas de la capa nuclear interna mediante inmunofluorescencia múltiple. Este trabajo confirma la expresión de CIRP y RBM3 en la retina neonatal expuesta a hipotermia tanto durante la PA (HYP-15ºC) como después de la PA (HYP-PA). Esto podría abrir un nuevo camino en la comprensión de los mecanismos moleculares que se producen ante la hipotermia.

Efecto del glaucoma experimental sobre la estructura del colículo superior

Bordone MP^a, Pasquini LA^b, Sande PH^a, Rosenstein REa
^a Laboratorio de Neuroquímica Retiniana y Oftalmología Experi- mental, Departamento de Bioquímica Humana, Facultad de Medicina, Universidad de Buenos Aires. CEFyBO-CONICET.
^b Instituto de Química y Fisicoquímica Biológica, Departamento de Química Biológica, Facultad de Farmacia y Bioquímica, Universidad de Buenos Aires.

melina_bordone@yahoo.com

Objetivos. El colículo superior (CS) es la principal área de proyección retinal en la rata. Hemos desarrollado un modelo de glaucoma experimental en ratas a través de la inyección intracameral de condroitín sulfato, que reproduce características centrales del glaucoma humano. El objetivo fue estudiar el efecto del glaucoma experimental sobre la estructura del CS.
Métodos. Se utilizaron ratas Wistar macho con 6 o 15 semanas de hipertensión ocular unilateral. Se registraron potenciales visuales evocados (VEP); se cuantificó el número de células ganglionares retinales (RGC) y se evaluó el transporte anterógrado desde la retina al CS. En el CS se analizó la inmunorreactividad para Iba-1, GSA y ED1 (marcadores microgliales), NG2, O1 y proteína básica de mielina (MBP) (marcado- res de oligodendrocitos), proteína glial fibrilar ácida (GFAP) (marcador de astrocitos), transportador vesi- cular de glutamato-2 (Vglut-2) (marcador de terminales retinales) y NeuN (marcador neuronal). Asi- mismo, se determinó el contenido lipídico (tinción de Red Oil), el número de células TUNEL(+) y la ultraestructura axonal.
Resultados. A las 6 semanas de hipertensión ocular, las amplitudes de los VEP y el transporte anterógrado al CS disminuyeron significativamente, aunque el número de RGC y sus terminales axona- les en el CS permanecieron inalterados. En el CS aumentaron significativamente los niveles de Iba1, GSA, GFAP, NG2 y O1 y el número de células TU- NEL(+) y disminuyó la marca de Red Oil. A las 15 semanas, las alteraciones funcionales y la respuesta glial fueron aún más marcadas. Se observaron células fagocíticas, mayor pérdida de lípidos y de la ultraestructura axonal, aunque el número de neuronas y la inmunomarcación para MBP permanecieron inalterados.
Conclusiones. Estos resultados sugieren una desconexión funcional entre la retina y el CS, acompañada por eventos apoptóticos y cambios en la estructura glial del CS ya en etapas tempranas que progresan en períodos más avanzados de hipertensión ocular.

Compatibilidad con resonancia magnética nuclear de implante ocular activo para tratamiento de glaucoma

Schaumburg F^a, Guarnieri FA^a,b

^aLaboratorio de BioMEMS, FI-UNER, Entre Ríos.
^b CIMEC (UNL-CONICET), Santa Fe. fschaumburg@bioingenieria.edu.ar

Objetivos. Estudiar la compatibilidad con la resonancia magnética nuclear (RMN) de implante ocular activo alimentado inalámbricamente para tratamiento de glaucoma (iMvalv). Específicamente: a) cuantificar las fuerzas y el torque inducidos por el campo magnético del resonador; b) cuantificar la absorción de energía electromagnética (SAR), la densidad de corriente y el aumento de temperatura debidos a la interacción con el campo de radiofrecuencia del resonador; c) identificar si hay efectos no deseados en el funcionamiento del implante y si la presencia del implante generará artefactos en las imágenes de RMN.
Métodos. Se calculó analíticamente el torque y la fuerza ejercida por el campo magnético del resonador y se comparó con el peso del implante según lo especificado por la norma ASTM F2052 y ASTM F2213. Se consideró la peor situación. Se creó un modelo computacional utilizando el método de los elementos finitos para simular la exposición a los campos de radiofrecuencia existentes en un resonador. El resultado fue comparado con los valores máximos permitidos por la Comisión Internacional sobre Protección frente a Radiaciones No Ionizantes (ICNIRP).
Resultados. El peso del implante resultó significativamente mayor que la fuerza inducida en el implante por el campo magnético. Se calculó el SAR, la densidad de corriente y el aumento de temperatura para diferentes frecuencias de resonadores comerciales. Las recomendaciones de ICNIRP no se excedieron.
Conclusiones. Los resultados obtenidos eran los es- perables debido a que los materiales utilizados para la construcción del implante son polímeros (que prácticamente no interactúan con el campo magnético), excepto por el cobre presente en la antena, que es diamagnético. Además, no se excedieron las recomendaciones de ICNIRP dado a que los resonadores están diseñados para que los campos electromagnéticos que generan no las sobrepasen y a que la modificación que el implante genera sobre los campos del resonador es de relevancia menor, según estudios realizados previamente.

Estudio preliminar de un microsensor de presión intraocular (PIO) asociado a una microválvula activa (iMvalv) para glaucoma

E, Cury J, Martínez Rau L, Guarnieri FA

Lab BioMEMS, Facultad de Ingeniería, Universidad Nacional de Entre Ríos.

elucassolari@gmail.com

Objetivos. Diseñar y caracterizar el concepto de un dispositivo biomédico implantable, asociado a una microválvula activa (iMvalv) para la reducción de la presión intraocular (PIO), capaz de registrar, procesar y transmitir inalámbricamente la señal de PIO.
Métodos. Mediante simulaciones numéricas y cálculos eléctricos se diseñó un elemento sensor capaz de medir presiones intraoculares fisiológicas y patológicas de hasta 45 mmHg. Se fabricaron sensores en el Lab BioMEMS con las especificaciones de biocompatibilidad, implantabilidad y funcionalidad diseñadas de 3mm de diámetro y se realizaron pruebas in vitro de columna de agua para caracterizarlos. Se diseñaron y fabricaron circuitos microelectrónicos ubicados en chips cuadrados de 1.5 mm de lado para acondicionar la señal de PIO, para su posterior radiotransmisión. Se comprobó su correcto funcionamiento mediante simulaciones de alto rendimiento. Actualmente se están realizando testeos experimentales. Se caracterizó una microantena comercial de 0.34 mm x 0.78 mm. Actualmente se está analizando su funcionamiento.
Resultados. Se determinó que para presiones fisiológicas y patológicas el sensor responde de acuerdo con lo calculado, lográndose discernir variaciones de presión de al menos 1 mmHg en todo el rango. Según las simulaciones, la microelectrónica cumplió con todas las especificaciones de diseño y la señal obtenida puede modularse para su envío inalámbrico. Se está realizando el testeo de la microantena para su utilización a 433 MHz (banda ISM: aplicaciones industriales-científicas-médicas).
Conclusiones. Lograron diseñarse y fabricarse las distintas etapas de un sensor de presión intraocular implantable. Aún es necesario compatibilizar las etapas para realizar ensayos in vivo.
of an implantable IOP sensor, these stages should be brought into line with each other so that in vivo tests can be conducted.

Estudio comparativo de tomografía óptica coherente de una microválvula activa para el tratamiento del glaucoma (iMvalv) y simulación por técnica ray tracing

Braggio L^a, Guarnieri FA^a,b

^a CIMEC - Centro de Investigación de Métodos Computacionales (CIMEC)-CONICET, Universidad Nacional del Litoral, Santa Fe.
^b Facultad de Ingeniería, Universidad Nacional de Entre Ríos (UNER).
luciano.braggio@gmail.com

Objetivos. Comparar los resultados obtenidos a partir de la simulación de la caracterización de la micro- válvula implantada en un paciente con las imágenes obtenidas de conejos implantados.
Métodos. A partir de los parámetros característicos del segmento anterior del ojo se realiza su modelo tridimensional, diferenciando cada una de sus estructuras. Esa geometría se importa a un módulo de simulación óptico donde se definen las propiedades ópticas de cada uno de los tejidos. Haciendo uso de un programa CAD, se realiza el modelo tridimensional de la microválvula y se lo importa al módulo óptico, donde también se asignan las propiedades ópticas de cada una de las partes de la iMvalv. Luego, cada uno de los bloques funcionales de un equipo de OCT se modelan y la simulación del escenario equipo de OCT/ ojo implantado se realiza por medio de la técnica de ray tracing. Se realiza la conexión entre el módulo óptico y un programa de computación científica de manera que los datos crudos de la simulación puedan procesarse y analizarse para así poder contar con los datos posprocesados.
Resultados. Se presentan las simulaciones del escenario simulado por ray tracing del TD-OCT del segmento anterior del ojo implantado y se compara la simulación con imágenes obtenidas por OCT realizado en iMvalv en ojos porcinos.
Conclusiones. La simulación por ray tracing permite analizar las imágenes obtenidas del implante iMvalv de manera cualitativa. En un futuro se procurará realizar un análisis cuantitativo de los datos obtenidos que permita validar el modelo y que sirva como herramienta previa a la hora de encarar rediseños o mejoras.

Estudio farmacocinético y de toxicidad de digoxina luego de administración intravítrea en conejos como potencial alternativa terapéutica en el retinoblastoma

Winter U^a, Buitrago E^a, Del Sole MJb, Williams G^a, Fandiño A^a, Croxatto JO^c, Chantada G^a, Schaiquevich P^a,d

^a Hospital de Pediatría Juan P. Garrahan, Buenos Aires.
^bCentro de Investigación Veterinaria de Tandil (CIVETAN)-CO- NICET, Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires.
^c Fundación Oftalmológica Argentina Jorge Malbran, Buenos Aires.
^d Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET)
winter.u.a@gmail.com

Objetivos. Utilizando la metodología de high throughput analysis para análisis de cientos de moléculas se propusieron los cardenolidos como alternativas farmacológicas activas en el retinoblastoma. Los objetivos del presente estudio fueron caracterizar la farmacoci- nética de la digoxina administrada por vía intravítrea (IV) y evaluar la toxicidad ocular y sistémica luego de su administración repetida en conejos.
Métodos. Se utilizaron dos grupos de conejos New Zealand (peso: 1,8-2,2 kg). El primer grupo recibió una dosis de digoxina IV y se obtuvieron muestras de humor vítreo, retina y plasma postinyección. La concentración de digoxina se cuantificó por inmunoensayo o HPLC. El segundo grupo fue tratado con 4 dosis de digoxina IV (1 μg) cada dos semanas en un ojo y vehículo de disolución de digoxina en el contralateral. Se realizaron controles clínicos, hematológicos, evaluaciones oculares (fundoscopía y electrorretinografía) y exámenes histopatológicos posteriores a la enucleación.
Resultados. La concentración vítrea máxima (Cmax) de digoxina calculada por el modelo farmacocinético fue de 8,5 μg/ml y se mantuvo por encima de la concentración necesaria para inhibir el 50% del crecimiento celular in vitro (IC50) por 24 horas luego de la inyección. La concentración plasmática fue <0,5 ng/ ml y en la retina se detectó hasta 16 horas postinyección. Luego de la tercera dosis se observó una reducción significativa de las amplitudes de las ondas a y b del electrorretinograma en el ojo tratado con digoxina (p<0,05). Los ojos tratados con digoxina mostraron alteraciones degenerativas de la retina en el sitio de descarga de la inyección.
Conclusiones. La administración IV de digoxina mostró una farmacocinética favorable, alcanzando concentraciones potencialmente terapéuticas en el vítreo y bajas concentraciones plasmáticas, lo que indicarían baja incidencia de toxicidad sistémica. Luego de 4 dosis de digoxina se observó toxicidad retinal localizada y ausencia de toxicidad sistémica. De acuerdo con estos resultados, la traslación al humano debería llevarse a cabo considerando el balance entre eficacia y toxicidad.

EL ARNm del factor de transcripción con caja homeo de conos y bastones como un marcador molecular en el retinoblastoma metastásico

Torbidoni AV^a, Laurent VE^a, Sampor C^a, Ottaviani D^a, Vázquez V^b, Gabri MR^c, Rossi J^d, de Dávila MT^b, Alonso C^a, Alonso DF^c, Chantada GL^a
a Servicio de Hematología-Oncología, Hospital de Pediatría Juan P. Garrahan, Buenos Aires.
^b Servicio de Patología, Hospital de Pediatría Juan P. Garrahan, Bue- nos Aires.
^c Laboratorio de Oncología Molecular, Universidad Nacional de Quilmes, Bernal.
^d Servicio de Inmunología, Hospital de Pediatría Juan P. Garrahan, Buenos Aires.
anavtorbi@gmail.com

Objetivos. Estudiar la detección del ARNm del factor de transcripción con caja homeo de conos y bastones (CRX, del inglés: conerod homeobox transcription factor) como marcador molecular-linaje específico para el retinoblastoma metastásico y la diseminación mínima (DM).
Materiales y métodos. Para validar a CRX como marcador se evaluó su expresión en 17 tumores retinoblastomas, dos líneas celulares de retinobastoma y 47 muestras de médula ósea (MO) de otros tumores no retinoblastomas. Se incluyeron 17 pacientes con retinoblastoma metastásico (9 al diagnóstico, 8 a la recaída) y se obtuvieron muestras de MO, sangre periférica y líquido cefalorraquídeo (LCR) del momento del diagnóstico, después de la quimioterapia de inducción, durante el seguimiento y después de trasplante autólogo de células madre. El ARNm de CRX se detectó mediante retrotranscripción seguida de PCR en tiempo real.
Resultados. El ARNm de CRX se expresó en todos los tumores y líneas celulares de retinoblastomas, pero fue negativo en todas las muestras de MO de pacientes sin retinoblastoma. En los nueve niños que se presentaron con metástasis al diagnóstico, la MO del diagnóstico fue positiva para CRX. Después de la quimio- terapia de inducción no fue evidente DM en la MO de estos pacientes. En el LCR de niños que tuvieron una recaída metastásica, CRX fue positivo en 11 casos estudiados. La DM en el LCR precedió a la recaída clínica en tres casos. No se observó DM concomitante en la MO de estos pacientes.
Conclusión. El ARNm de CRX es un nuevo marcador para el retinoblastoma en sitios extraoculares. En los pacientes con metástasis en la MO hay respuesta rápida, completa y sostenida después de la quimioterapia de inducción. En todos los pacientes con metástasis secundaria se produce recaída en el LCR independientemente de la MO, lo que sugiere que el LCR funcionaría como un nicho santuario.